primer6.0引物设计教学教程.doc
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1、.primer 6.0 引物设计教程首先,需要知道基因序列,如,我们要设计 rat的 CK18 mRNA检测的引物,我们先到 http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/ 这个网站查找 CK18 mRNA的基因序列,首先选择 Nucleotide 然后在搜索栏输入基因序列号(如果不知道基因序列号则输入 rat CK18)如图然后点击搜索,就会出现 rat CK18 mRNA的基因序列.现在,往下拉就会看到基因序列将这个序列复制到 primer 6.0中就可以进行引物设计,我们先打开 peimer 6.0基因序列号.破解版打开会出现这个对话框,关闭即可将序列复制至这个对话框点击新建.点
2、击 Add出现下面对话框,这里可以选择引物在序列哪些地方设计引物,我一般不更改,也就是引物可以设计在整个序列,你也可查一下序列有几个区,一般引物应该跨两个区。点击这个图标.之后点击 primer Parameters.这里可以设置退火温度、引物长度、产物长度等,我一般只是更改产物长度,我一般设为 100到 300bp,因为如果产物太大,在染料法中会影响扩增效率,.之后点击 Search 之后出现下面对话框点击 OK 出现下面引物序列.这个时候引物设计完成,我们需要对引物进行验证,我一般到NCBI(http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/)上验证,进去后点击最下面菜单中的 BLAST之后点击 Primer-BLAST点击这个图标点击这个图标.将前引物复制到图中位置将后引物复制(注复制前引物用 Copy Sense Primer,复制后引物用 Copy Anti-sence Primer 点击右键即出现复制菜单)后引物放到下图位置在这输入前引物.之后将图中位置的 homo sapiens 删除后输入 rat出现上图对话框时选择 Rattus(taxid:10114)之后点击 Get Primers在这输入后引物
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