HIV实验室风险评估-.doc4.doc
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1、|HIV 抗体初筛实验室风险评估报告1.评估目的获得性免疫缺陷综合症(AIDs)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的严重威胁人类健康的性传播疾病,临床实验室工作人员每天处理着大量血液标本,因此他们面临着严峻的HIV 职业暴露危险,保护临床检验人员的健康,已成为迫切需要解决的问题。此次评估的主要目的是在实验活动中根据 HIV 可能对个体或群体或实验环境造成危害的高低来制定相应措施的安全防范制度和操作程序,选择相应等级的生物实验室及设备配置,实验人员使用相应措施的防护措施和使用相符的安全防护设备,以及在发生意外泄漏或意外事故时能及时采取有效措施,来达到确保实验工作人员不被感染和实验环境不被污染
2、的目的。2.评估依据2.1 病原微生物实验室生物安全管理条例2.2 实验室生物安全通用要求 GB19489-20082.3 人间传染的病原微生物名录2.4 WHO 实验室生物安全手册2.5 艾滋病防治条例2.6 中华人民共和国传染病防治法2.7 可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定2.8 全国艾滋病检测技术规范 2009 年修订版3、危害程度分类 3.1 分类等级在卫生部公布的人间传染的病原微生物名录中将此病毒列为第二类病原微生物,属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属,但一般情况下对未与 HIV 无症状携带和艾滋病患者有性接触和血液传播的健康工作者、群体、家畜
3、或环境不会引起危害的病原微生物。3.2 不同实验操作生物安全实验室级别要求HIV 抗体检测(包括筛查和确证实验) 、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合级生物安全实验室(BSL-2)要求的艾滋病检测实验室中进行。本实验室是 HIV 初筛实验室,应用ELISA 方法进行 HIV 抗体筛查。根据名录的规定,未经培养的感染材料的操作可在BSL-2 实验室进行。4、生物因子的特性4.1 HIV 在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。迄今为止,根据血清学反应和病毒核酸序列测定,全球流行的 HIV 可分为 2 型:HIV 1 型和 HIV 2 型。在 HIV 1 型内,根据编码包膜蛋白的
4、 env 基因和编码壳蛋白的 gag 基因序列的同源性又进一步分为 3 个组:组(主要组) 、组(外围组)和组(新组或非 M 非 O 组) ,组内又可分为 10 个亚型。在 HIV 1 型和 HIV 2 型之间,其核苷酸序列有 45的同源性,并且存在免疫交叉反应。应用免疫印迹法(West blot)可以将二者明确地区别开来。4.2 环境中的稳定性:HIV 对理化因素抵抗力较弱,56加热 30min 可被灭活,但在室温下可存活 7 天。经化学消毒剂 0.5%次氯酸钠、10%漂白粉、50%乙醇、0.3%H2O2、5%来苏儿处理 10min 可被灭活。紫外线对该病毒无杀灭作用。4.3 变异性:HIV
5、 基因组可发生变异,最易发生变异的基因编码包膜糖蛋白 env 和调节基因nefc,根据 env 基因序列异同可将 HIV -1 型分为 A、B、C、D、E、F、H、O8 个亚型。Env的变异率为千分之一。|4.4 传染源:主要的是 HIV 携带者及 AIDS 患者。4.5 传播途径:主要通过血液传播、母婴传播、性传播、医源性感染。4.6 易感性:免疫功能低下者、结核病患者、器官移植者、输血及用血液制品者、性滥者、同性恋、吸毒者高危性人群易感。4.7 潜伏期:是从 HIV 感染到出现艾滋病临床症状和体征的时间。平均潜伏期(50的 HIV感染者进展到艾滋病期的时间)为 7 年8 年。在感染后的一般
6、需要 2-12 周,平均 45 天左右血液中才可检测到 HIV 抗体。从感染到机体产生抗体的这一段时间检测不到 HIV 抗体,医学称之为窗口期。在窗口期虽测不到 HIV 抗体,但若被感染,体内同样有 HIV 病毒,同样具有传染性。4.8 剂量-效应(反应)关系:血液中 HIV 浓度达 1.00104拷贝/ml,被 HIV 污染环境的锐器剌伤而感染的比率为 0.3%;可致人患艾滋病4.9 致病性: HIV 病毒侵入人体后,其表面糖蛋白 gp120 与细胞表面受体蛋白 CD4 以高亲和力结合,吸附到宿主细胞上;gp120 再与宿主细胞表面辅助受体相互作用,使病毒与宿主细胞膜更接近;gp41 产生一
7、系列构象变化,其 N 端的融合肽片段插入宿主细胞膜,导致病毒包膜与细胞膜的最终融合,病毒 RNA 进入细胞。在 HIV 感染后,最先能够监测到病毒RNA、然后是 p24 抗原,最后是抗体。在感染后的 1014 d 内,病毒 RNA 水平是呈指数上升,随后下降并保持在持续稳定的水平上,进入 HIV 无症状期。p24 抗原水平随着病毒 RNA水平的发展而发展,在急性感染期就可以出现,被认为是病毒复制的间接标志,但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比 RNA 晚。从 HIV 感染到能够检测出 HIV 抗体这一时期,被称作“窗口期” 。在窗口期,能够通过病毒 RNA、p24 抗原和 CD4 淋
8、巴细胞水平来确定 HIV 感染。CD4 淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降,当其在血液中细胞下降到 200 个/mL 时,就会发生严重的免疫缺陷,患者就被确诊为艾滋宿主范围:宿主范围较为广泛。5、流行病学、诊断、治疗和预防5.1 流行病学自 1981 年美国首次报告艾滋病以来,被西方人成为“20 世纪的瘟疫” 。这种病以侵袭人体免疫细胞 CD4 为主,造成细胞免疫功能缺陷,并继发体液免疫功能缺陷。自1985 年我国首次报道例以来艾滋病在我国的流行呈逐年上升的趋势,目前已进入快速增长期。随着艾滋病流行趋势的日益严重,临床就诊的患者也越来越多,患者和无症状病毒感染者是本病的传染源。病毒主要存在于
9、感染者的血液、精液、子宫和阴道分泌物中,也可在乳汁、唾液、尿液和眼泪中分离到病毒,但以血液、精液、子宫和阴道分泌物中的病毒滴度最高,而其他体液(唾液、尿液和眼泪)由于病毒滴度低而不足以构成传染。高危人群有静脉注射毒者、性病患者、暗娼、HIV 感染者的婴儿、部分有偿供血者、多次输血和血制品者及血透者。HIV 传播的先决条件为大量而完整的传染性病毒进入易感者的恰当门户,感染 HIV 的可能程度取决于接触患者体液的机会、接触次数、病毒量以及是否采取保护措施。5.2 临床表现从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程,临床上将这个过程分为四期:急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。不是每个感染
10、者都会完整的出现四期表现,但每个疾病阶段的患者在临床上都可以见到。5.2.1 急性感染期窗口期也在这个时间。HIV 侵袭人体后对机体的刺激所引起的反应。病人发热、皮疹、淋巴结肿大、还会发生乏力、出汗、恶心、呕吐、腹泻、咽炎等。有的还出现急性无菌性脑膜炎,表现为头痛、神经性症状和脑膜刺激症。|5.2.2 潜伏期感染者可以没有任何临床症状,但潜伏期不是静止期,更不是安静期,病毒在持续繁殖,具有强烈的破坏作用。潜伏期指的是从感染 HIV 开始,到出现艾滋病临床症状和体征的时间。艾滋病的平均潜伏期,现在认为是 2-10 年。这对早期发现病人及预防都造成很大困难。5.2.3 艾滋病前期潜伏期后开始出现与
11、艾滋病有关的症状和体征,直至发展成典型的艾滋病的一段时间。主要的临床表现有: .淋巴结肿大 此期最主要的临床表现之一;全身症状 病人常有病毒性疾病的全身不适,肌肉疼痛等症状;各种感染 此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身症状外,患者经常出现各种特殊性或复发性的非致命性感染。5.2.4 典型的艾滋病期有的学者称其为致死性艾滋病,是艾滋病病毒感染的最终阶段。此期具有三个基本特点:严重的细胞免疫缺陷;发生各种致命性机会性感染;发生各种恶性肿瘤。艾滋病的终期,免疫功能全面崩溃,病人出现各种严重的综合病症,直至死亡5.3 实验室诊断5.3.1HIV 抗体检测检测 HIV 抗体是常规使用的 HIV 病原学诊
12、断的方法。HIV 抗体检测方法有初筛试验和确认试验组成。初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断。目前的 HIV抗体检测都是使用新一代试剂,可同时检测 HIV1 型和 HIV2 型。初筛检测的方法有间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和金标法(SPOT),确认检测的方法为蛋白印迹试验(WB)。 医生一般会根据病人的感染史,如供血史、受血史、性接触史、吸毒、高危职业等结合临床体征对病人进行 HIV 检测。检测出 HIV 抗体的时间取决于HIV 感染者的反应性和 HIV 病毒的特性,一般在感染后 13 个月出现 HIV 抗体。HIV 抗体初筛结果阴性者或可疑者,半年后可进行
13、第二次检测,但不需要多次检测。HIV 抗体初筛结果阳性者,须进一步做确证试验。确证试验报告 HIV 抗体可疑的病人,应在 3 个月后进行复查。确证结果阳性者都具有 HIV 特异的带型,确认结果是可靠的。 5.3.2 P24 抗原检测 P24 抗原检测是诊断早期 HIV 感染的一种方法。HIV 感染者多数在感染 13 个月才出现 HIV 抗体,抗体出现之前的这个时期称为“感染后窗口期”。在窗口期,HIV 抗体是检测不到的。P24 抗原的检测有助于多数急性感染者血清 HIV 抗体阳转之前的诊断,大约可以使抗体窗口期缩短 1 周,因为估计检测 P24 抗原到检出 P24 抗体间隔只有 1 周时间。但
14、由于不是所有新近感染的人都可以检出 P24 抗原,加上该项检测费用较高,所以一般不作为常规诊断项目。 5.3.3 白细胞和淋巴细胞检测医生对 HIV 抗体确认为阳性者进行临床分期或治疗时,才需要做一些辅助性实验室检查,如白细胞和淋巴细胞检测。 AIDS 病人周围白细胞及淋巴细胞总数是下降状态,淋巴细胞的变化可用于评价机体免疫系统损害的程度,CD4 值对于评价 HIV 感染的病期及预后极为重要,特别是病程后期更为重要。 (1)WBC、Hb 下降。 (2)CD4T 淋巴细胞总数下降,200/mm3,或为 200500/ mm3。 (3)CD4/CD8 比值1(正常时,CD4/CD8 比值1)。 (
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