组胺检测.doc
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1、Transia 组胺半定量检测管组胺半定量检测管 产品编号:HI0480-48 次检测简介简介 Transia 组胺检测检测试管主要用于半定量检测鱼肉中的 组胺。试验原理试验原理 经过用 trichloracetic acid 溶液的提取,组胺被对苯醌吸 附并结合在一起(吸附步骤) ,在检测的测试管中包被有 组胺特异性抗体,通过竞争性酶联免疫法对样品中的组 胺进行检测。材料材料 试剂盒中材料试剂盒中材料 试剂盒主要包括两部分,一部分是用于样品提取,另一 部分用于检测试验用。 样品提取试剂盒 瓶 1:吸附溶液:对苯醌乙醇溶液-1x15mL(注意:有毒)瓶 2:neutralising 和 blo
2、cking 溶液:三乙醇胺氨基乙酸 溶液-1x26mL(注意:具有刺激性)检测试剂盒 测试管 1x48 个 瓶 3:阴性质控:直接应用液-1x8mL(注意:具有腐蚀 性) 瓶 4:组胺标准品:组胺(200ppm)-1x20mL(注意: 具有腐蚀性) 瓶 5:酶标记物:组胺-过氧化物酶-直接应用液-1x26mL 瓶 6:洗涤缓冲液-10 倍浓缩液-1x200mL 瓶 7:基质:过氧化物尿素-1x30mL 瓶 8:发色剂:TMB-1x30mL 瓶 9:终止液:硫酸-直接应用液-1x30mL 瓶 10:稀释液:trichloracetic acid(10%)-1x30mL试验需要但未提供的设备试验需
3、要但未提供的设备 样品及试剂制备用 天平 量筒 100mL 和 1L 磁力搅拌器 混合器或胃袋式均质器 塑料瓶 50mL 或 100mL 带盖的塑料管 5mL 和 10mL 试管架微量吸头手套 玻璃瓶(100mL)和烧杯(1L) 漏斗 滤纸制备额外的洗涤缓冲液用制备额外的洗涤缓冲液用 容量瓶 1L;烧杯 1L PH 试纸酶免试验用酶免试验用 试管架 塑料洗瓶 吸水纸 微量移液器 50ul 和 500ul 管式检测仪或分光光度计(450nm)试验需要的材料试验需要的材料 样品制备用 双蒸水 纯的 trichloracetic acid(液体或粉末)制备额外的洗涤缓冲液用 如果试剂盒中的洗涤缓冲液
4、不足,可以用 PBS 与吐温混 合配制。 PBS:NaCl 7.650g Na2HPO42H2O 0.724g KH2PO4 0.210g H2O 1L 吐温 20: 0.5mL储存条件储存条件 样品制备试剂盒可以在室温环境中保存。 试验检测试剂盒必须保存在 2-8C安全性安全性 使用该试剂盒时一定要遵守实验室操作规程。穿安全服、 带手套和眼镜,谨防试剂入口。瓶 3、4 和 10 含有 trichloracetic acid,一旦试剂接触皮肤或溅入眼镜,要及 时用大量清水冲洗。测试步骤测试步骤 准备试剂准备试剂 在使用前每一瓶溶剂都要混合均匀 准备提取缓冲液(10%trichloracetic
5、 acid) 每 9 个样品需要用 1L 的提取缓冲液;最好穿安全服并带 手套。 1、 称取 100g 的 trichloracetic acid。 2、 转移到 1L 的烧杯中,并加入 1L 的双蒸水。 3、 用磁力混合器搅拌直至完全溶解。 4、 在室温中(18-30C)最多可以保存 4 周,在 2-8C 条件下最多可以保存 3 个月。稀释洗涤缓冲液稀释洗涤缓冲液 稀释可以提前或在第一次孵育期间进行。 (请看试验步骤 4) 1、 用双蒸水 1:10 倍的稀释浓缩的洗涤缓冲液-200mL 浓缩的洗涤缓冲液+1.8L 双蒸水。 2、 混合并装入洗瓶中。 3、 在 2-8C 保存洗涤缓冲液制备额外
6、的洗涤缓冲液制备额外的洗涤缓冲液 1、 将配备缓冲液需要的材料放入到一个 1L 的烧杯中, 加入 800mL 的双蒸水,并混合均匀。 2、 调节 PH 值在 7.20.1 之间,并定溶至 1L 装入容量 瓶。 3、 在 2-8C 条件下,最多可以保存 3 个月。制备标准溶液制备标准溶液 我们推荐按照如下的浓度进行配备: 200ppm、100ppm、50ppm、25ppm 标准溶液不可以提前制备,可以在吸附步骤之前准备。 注意:每个试管上的盖子不要交叉使用。 1、 在 4 支 5mL 的塑料管(要求带盖)标记浓度,并设 计好每个标准品的浓度,如: 200ppm、100ppm、50ppm、25pp
7、m。 2、 在配备 200ppm 的试管中加入 1mL 的 200ppm 标准 液(瓶 4) 。 3、 其他 3 支试管每一个试管中加入 500ul 的稀释液。 4、 从标记 200ppm 的试管中取 500ul 溶液加入到标记 100ppm 的试管中。充分混合。 5、 从标记 100ppm 的试管中取 500ul 溶液加入到标记 50ppm 的试管中。充分混合。 6、 从标记 50ppm 的试管中取 500ul 溶液加入到标记 25ppm 的试管中。充分混合。 7、 从标记 25ppm 的试管中丢弃 500ul 的溶液。制备样品制备样品 所有冰冻鱼肉样品都必须在室温中解冻。所有样品制备用的容
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