蛋白质等电点的应用.ppt

蛋白质等电点的应用,化学系化学专业2班罗佳04081052,蛋白质等电点的应用,等电点 等电点时蛋白质的特殊性质 主要应用 等电点沉淀与分离 电泳分离 等电聚焦电泳 目前研究应用情况 等电点的测定,等电点,以氨基乙酸为例,离解平衡为:氨基乙酸 Ka1 双极离子 Ka2 氨基乙酸 阳离子 pI=1/2(pKa1+pKa2) 阴离子 当氨基酸的各种带电离子所带正电荷数与负电荷数相等时,此时溶液的pH就是这种氨基酸的等电点(pI). 蛋白质是由氨基酸组成的,除了有末端-NH3+和末端-COO-外,参与其组成的氨基酸残基侧链上还有酸、碱性基团,因此蛋白质是两性物质,也有等电点.,阴 极,阳 极,pH=pI,pH<pI,pH>pI,带正电荷,带负电荷,净电荷为零,导电率,溶解度,渗透压,粘度,达到最低,等电点时蛋白质的特殊性质,原因:在等电点时，蛋白质分子以双极离子存在，总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒，因而最不稳定，溶解度最小，易沉淀析出。,电泳分离,沉淀分离,pH=pI 溶解度最小,等电点沉淀与分离,大部或全部沉淀下来,pHpI,仍留在溶液中,蛋白质的分离,沉淀出来的蛋白质可保持天然构象，能再溶解于水并具有生物活性。,等电聚焦电泳,加 酸,加 碱,pI,小,大,pH,高,低,关键是形成pH梯度,等电点的测定,从理论上讲,一种蛋白质只有一个等电点 ,但等电点测定结果受实验方法和条件 (溶剂性质、离子强度等)影响较大， 一种蛋白质也可能具有多个等电点。 在抗HBsAg 单链抗体的等电点测定和结构模拟这篇文章中,作者指出：“很多学者发现,经过各种色谱均证实为纯品的重组蛋白在等电聚焦时表现为多条带,这种现象的出现可能与蛋白质空间构象的差异有关.” 影响蛋白质等电点的因素有很多,谢 谢！,