硒检测作业指导书.doc

硒检测作业指导书硒检测作业指导书1.1.试剂及其配制试剂及其配制1.1 硒标准贮备溶液（0.400mg/ml）:称取 0.1405g 二氧化硒（纯度 99.9%）于 50ml 烧杯中，用适量水溶解后，移入 250ml 量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。1.2 硒标准中间溶液（4.00ug/ml）：量取 2.50ml 硒标准贮备溶液于 250ml 量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。1.3 硒标准使用溶液（0.100ug/ml）：量取 2.50ml 硒标准中间溶液于 100ml 量瓶中，加盐酸溶液至标线，混匀。1.4 高氯酸-硫酸-钼酸钠混合溶液：称取 7.5g 钼酸钠溶于 150ml 水中，加入 200ml 高氯酸（=1.66g/ml）和150ml 去硒硫酸，混匀。贮于 500ml 试剂瓶中。1.5 去硒硫酸：量取 200ml 硫酸（=1.84g/ml） ，在搅拌下，缓缓加入 200ml 水中，加 30ml 氢溴酸（=1.38g/ml） ，混匀，置沙浴上加热至冒白烟。1.6 盐酸：=1.19g/ml。1.7 EDTA-盐酸羟胺混合溶液：量取 100mlEDTA 溶液，10ml 盐酸羟胺溶液，加水稀释至 1000 魔力。1.8 EDTA 溶液（0.2mol/l）:称取 37g EDTA 于 250ml烧杯中，加适量水，加热溶解，冷却后稀释至 500ml。1.9 盐酸羟胺（100g/l）：称取 10g 盐酸羟胺于 100ml烧杯中，用水溶解后，并稀释至 100ml。1.10 甲酚红指示液（0.4g/l）：称取 40mg 甲酚红于100ml 烧杯中，加少量水及 2 滴氨水溶液溶解，加水至100ml。1.11 氨水溶液（1+1）：取一定体积氨水（=0.90g/ml）与等体积水混匀。1.12 盐酸溶液：0.1mol/l。1.13 2,3-二氨基萘（DAN）溶液（1g/l）：称取400mgDAN 于 500ml 烧杯中，加 400ml 盐酸溶液溶解，然后转入 1000ml 锥形分液漏斗中，在振荡器上振荡 15min使其全部溶解，加入 80ml 环己烷再振荡 5min，静置分层后，收集水相，弃去有机相，如此反复纯化数次，直至有机相的荧光强度降到接近环己烷的荧光强度为止。将纯化后的 DAN 溶液贮于棕色瓶中，加入环己烷使其覆盖液面约1cm 厚，置于冰箱中保存，有效期一个月。1.14 环己烷：若有荧光杂质需重蒸馏提纯，用过的环己烷重蒸馏后可再使用。2.2.绘制工作曲线绘制工作曲线a）取 6 个 50ml 烧杯，分别加入0ml，0.50ml，1.00ml，2.00ml，3.00ml 和 4.00ml 硒标准使用溶液，加水稀释至约 10ml，混匀；b)加 5ml 混合酸溶液，在沙浴中加热消化至冒浓白烟，至溶液变黄。取下冷却至室温，溶液回复为无色，用水稀至约 10ml。加 5ml 盐酸，将烧杯放在沙浴表面加热至溶液变黄为止。取下冷却至室温；c)将溶液移到 50ml 比色管中，用少量水洗净烧杯，洗液并入比色管中。加 5mlEDTA 混合溶液，45 滴甲酚红指示液。用氨水溶液或盐酸液调节 pH 为 1.52.0（粉橙色） ，加 3.0mlDAN 溶液，摇匀，置沸水浴中加热 5 分钟取下冷却到室温。将溶液移入 60ml 分液漏斗中，用少量洗涤比色管，洗液并入分液漏斗中。加 3.0ml 环己烷，振摇4min，分层后弃去水相；d)将环己烷层从分液漏斗移入 1cm 测定池中，在荧光分光光度计上，以 376nm 为激发波长，520nm 为发射波长，环己烷为参比。测定硒的荧光强度 Ii，将测定数据记入表中；e)以荧光强度 Ii-Io(标准空白)为纵坐标，相应硒含量（ug）为横坐标绘制工作曲线，并计算曲线斜率 b 和截距a。3.3.样品测定样品测定量取 5.0ml50.0ml 过滤的水样，于 50ml 烧杯中，一下按绘制工作曲线步骤测定荧光强度 Iw,同时测定分析空白荧光强度 Ib。4.4.记录与计算记录与计算将测得数据记入表中，按式（19）或式（20）计算水样中硒的浓度：=m/v×1000(19)=(Iw-Ib)-a/bV×1000(20)式中：水样中硒浓度，单位为微克每升；m硒的量，单位为微克；Iw水样平均荧光强度；Ib分析空白平均强度；a工作曲线截距；b工作曲线斜率；V水样体积，单位为毫升。