血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定.doc

血血清清 乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶 D DG GK KC C 推推荐荐方方法法 测测定定1 1. . 实实验验原原理理德国临床化学学会 (DGKC)推荐的连续监测法 3 3 。LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+2 2. . 标标本本：2.1 病人准备：无特殊。2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。3 3. . 标标本本存存放放： 3 天内的活性损失： 28保存：<8%；1525保存： <2%。4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。6 6. . 实实验验材材料料6.1 试剂 奥林巴斯 LDH 测定试剂盒 试剂 1，试剂 26.1.1 试剂准备 试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存 ：试剂保存于 28，若无污LDH染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.4 注意事项 试剂中含叠氮钠（ 0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2 校准品 使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7 7. . 仪仪器器 ：奥林巴斯 AU2700 生化分析仪8 8. . 操操作作步步骤骤8.1 项目基本参数：参见AU2700 生化分析仪项目测定参数.SOP 文件8.2 仪器操作步骤：参见AU2700 生化分析仪操作规程 .SOP 文件9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程 .SOP 文件。1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 LDH 校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行LDH 活力检测，可以直接使用A/min 均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算LDH 活力的计算因子见下表：A/min×因子 = LDH 活力 U/L底物起始的反应（ 37） 样品起始的反应（37）340 nm 10080 8095334 nm 10275 8250365 nm 18765 150001 12 2. . 参参考考值值范范围围1 U/L女性 男性成人： 135215 135225儿童： 130 天 145765 12573531 天 1 年 190420 17045013 岁 165395 15534546 岁 135345 15534579 岁 140280 1453001012 岁 120260 1203251315 岁 100275 1202901618 岁 105230 105235参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ：乳酸脱氢酶（ LDH）由五种不同的同工酶组成，催化L-乳酸与丙酮酸的相互转换。LDH 存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多种病理情况下出现 LDH 活力的升高，如心肌梗死、癌症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于LDH 缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作LDH 同工酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶。1 14 4. . 操操作作性性能能14.1 线性范围： 5-1200U/L。14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标准方法， AU2700 批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS 的规则。批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)样品 11782.001.12样品 11701.620.95样品 21872.121.14样品 21762.481.41样品 35662.270.40样品 35663.610.6414.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与 IFCC 参考方法(x)，同时对 79 个样品进行 LDH 检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x+5.9U/L；r =0.997。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。14.5 病人结果可报告范围： 5-1200U/L。1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法对 LDH 活力检测的最大A/min 在 340、334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性17.1 本法对 LDH 活力检测的最大A/min 在340、334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察到干扰。血红蛋白浓度0.5g/L 会影响检测结果。1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.89-94.2.Moss DW, Henderson AR. Digestive enzymes of pancreatic origin. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemie. (German Society for Clinical Chemistry). Recommendation for the determination of the catalytic concentration of lactate dehydrogenase at 37. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:897-9.2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。