消 毒 剂 对 皮 肤 消 毒 模 拟 现 场 试 验.docx
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消 毒 剂 对 皮 肤 消 毒 模 拟 现 场 试 验.docx
消 毒 剂 对 皮 肤 消 毒 模 拟 现 场 试 验2.1.2.7.1 目的 测定消毒剂对人工污染于皮肤表面细菌的杀灭作用,以验证该消毒剂对皮肤消毒实用剂量。2.1.2.7.2 试验器材 (1)试验菌株:金黄色葡萄球菌 ATCC 27217,对尚需用于杀灭其他特定细菌者,可增用该特定细菌进行试验。(2)胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA),见附录 A。(3)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)。(4)中和剂(中和剂经鉴定合格)。(5)液体肥皂 200g/L。(6)金属筒 (直径 2.2cm、高度 3cm)。(7)尼龙刮菌棒。(8)无菌纱布巾。(9)吸管、试管、平皿若干。(10)振荡混合器。(11)一次性接种环(直径 4mm)。(12)抗生素软膏。(13)皮肤消毒剂。(14)恒温箱。2.1.2.7.3 试验步骤(1)菌悬液的制备按 2.1.1.2.3 规定的方法和要求进行。(2)使用液体肥皂清洗受试者前臂内侧 1min,用自来水冲净残留皂液,然后用无菌纱布擦干,以去除前臂内侧表面污染的自然菌。(3)用一端醮有印墨直径为 3.0cm 的玻璃筒扣印在受试者的每只前臂中段(不要在手腕和肘皱褶处),划分出一个试验区。(4)使用加样器取 10l 上述菌悬液,接种于前臂试验区(使回收菌落数为 2×106 cfu/试验区1×107 cfu/试验区),用一次性接种环,把菌悬液涂成一圆形,与试验区边缘应有 4mm5mm 的距离,在空气中自然干燥。(5)根据消毒剂使用说明书的方法对右前臂内侧进行消毒,一般设定作用时间为 1 min3min。(6)消毒后用中和剂对前臂上接种的区域进行取样。采样时,将金属筒放置于试验区中间部位,罩住染菌区,不要接触到盖有印墨的边缘。将 1.0ml 中和剂吸移至金属筒内,用尼龙刮菌棒刮洗金属筒罩住区域内的皮肤 60s,将筒内液体吸移至试管内,再加 1.0ml 中和剂对该区域内的皮肤进行第二次刮洗 30s,将第二次擦洗的液体,注入含第一次刮洗液体的试管中,作为试验组样本。(7)以蒸馏水代替消毒剂对左前臂中段做同样处理,作为对照组样本。(8)每次试验分别将未用过的同批中和剂、稀释液各 1.0ml 作为阴性对照组样本。(9)分别取适宜稀释度试验组、对照组样本和阴性对照组样本各1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿,每个样本接种 2 个平皿,放 37恒温箱中培养 48h, 观察最终结果。(10)计算杀灭对数值。(11)试验不得少于 15 人次。2.1.2.7.4评价规定对照组回收菌落数为 2×106cfu/试验区1×107cfu/试验区,阴性对照组应无菌生长,且对每一人次皮肤表面人工污染的金黄色葡萄球菌的杀灭对数值均3.00 可判为消毒合格。2.1.2.7.5 注意事项(1)受试者录用标准1)年龄介于 18 岁至 65 岁的男性或女性;2)受试者应身体健康;3)前臂皮肤应完好无损且没有皮肤病及其它皮肤问题。(2)排除受试者的标准,如果受试者有下列情况之一,不能被录用参加试验1)怀孕妇女;2)诊断患有糖尿病、肝炎、艾滋病(HIV 阳性)、器官移植者。(3)试验采样结束后,先用 70%的酒精对受试者前臂进行消毒,然后用皮肤消毒剂对两只前臂进行消毒处理,处理后清水冲洗,擦干,再涂少量的抗生素软膏于试验区,以防皮肤感染。(4)在试验完成后的 48h 至 72h 内,受试者如发现前臂上有小脓疱、水疱,隆起的红色痒疱,应及时通知检验单位。