消毒剂对手消毒模拟现场试验.docx

消毒剂对手消毒模拟现场试验2.1.2.5.1 目的 用于测定消毒剂对人工污染于手表面细菌的杀灭作用，并作为确定该消毒剂对手消毒实用剂量的参考。2.1.2.5.2 试验器材 （1）大肠杆菌 8099 或 NCTC 10538，对尚需用于杀灭其他特定细菌目的者，可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按 2.1.1.2 规定的方法和要求进行。（2）胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）：见附录 A。（3）胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）：见附录 A。（4）中和剂（以 TSB 为溶剂，经鉴定合格）。（5）液体肥皂 200g/L。（6）参考样品：正丙醇 60%（V/V）与异丙醇 60%（V/V）。（7）标准硬水：见附录 A。（8）磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L，pH7.2)。（9）无菌纱布巾。（10）吸管、试管、平皿若干。（11）振荡混合器。2.1.2.5.3 试验步骤(1)菌悬液的制备 取 2 支在 TSB 中培养 18h24h 的大肠杆菌培养物分别接种于 1LTSB 大三角烧瓶中，在 36±1培养箱中培养18h24h，用 TSB 将其稀释为 2×108cfu/ml2×109cfu/ml 菌悬液。（2）将 12 名15 名志愿者随机分为两组，第一组使用参考样品，第二组使用试验样品（3）使用液体肥皂洗手 1min 去除手表面污染的自然菌，然后用无菌纱布将手擦干。（4）将 2×108cfu/ml-2×109cfu/ml 大肠杆菌的菌悬液放入一无菌容器中，（5）将手掌中间到指尖部位浸入菌悬液中，手指分开，停留s，将手离开菌悬液，在空气中干燥min。（6）干燥后立即将拇指与其他手指尖在含 10ml TSB 的平皿中搓洗min，取适当稀释度接种平皿。计数菌落数，作为试验前菌数。（7）不再重复污染手，立即进行消毒处理。（8）试验样品组：按说明书介绍的用量、作用时间和使用频率以标准的洗手方法（如图 2-1）搓擦 30s60s（卫生手消毒）或最长5min（外科手消毒）。以流动的自来水冲洗 5s，抖掉手上残留的水。立刻将拇指与其它手指尖在含 10ml 中和剂的平皿中搓洗 1min，做适当稀释后，分别取样液 1.0ml 以倾注法接种两个无菌平皿，放37恒温箱培养 48h，计数菌落数。(9)参考样品组：对于卫生手消毒，取 60%异丙醇 3 ml 到入手心中，按标准的洗手方法用力搓擦 30s。以确保手的所有部位均匀接触异丙醇。重复使用异丙醇按上述方法搓擦使总的搓擦时间为 60s。对于外科手消毒，使用 60%正丙醇 3ml，按标准的洗手方法用力搓擦，当接近干燥时，再加 3ml 正丙醇搓擦。以保持作用 3min。用流动的自来水冲洗 5s，抖掉手上残留的水。其余步骤与试验样品组相同。1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背 5.拇指在长中转动搓擦 6.指尖在掌心中摩擦 图 2-1 标准的洗手方法(10) 在试验当日，第一组与第二组样品对换，重复上述试验。(11) 分别计算参考样品组和试验样品组的菌数减少的对数值。2.1.2.5.4 评价规定(1) 试验样品的杀灭对数值大于或等于参考样品的杀灭对数值为合格。(2) 若试验样品的杀灭对数值小于参考样品的杀灭对数值，应进行统计学处理，以确定差异是否显著。(3) 若试验样品的杀灭对数值不显著小于参考样品的杀灭对数值，可判为消毒合格。若试验样品的杀灭对数值显著小于参考样品的杀灭对数值，表明该试验样品不符合本规范的要求。2.1.2.5.5 注意事项 （1）试验必须在同一受试者、同一天、相同环境、同样条件下进行，使试验样品和参考样品的结果具有可比性。（2）所有受试者应年满 18 岁，身体健康。手部皮肤应无破损、无皮肤病，手指甲短而干净。（3）试验用菌悬液应在第 1 只手浸入后 3h 内使用。在 1 次试验中，无论使用试验样品还是参照样品，所有受试者手的染菌都应使用同一批菌悬液。（4）对受试者，在每次试验结束时，应及时对双手进行彻底的消毒处理。