抗-HBs效价测定RIA法.doc

抗抗-HBs-HBs 效价测定效价测定 RIARIA 法法1 1 试剂试剂1.1 用（人）HBsAg（亚型 ad,ay）包被的聚乙烯珠子。1.2 125I 标记的（人）HBsAg（亚型 ad,ay）试液。1.30.01mol/L Tris 缓冲液，内含 4%牛血清白蛋白，pH7.4。1.4 抗-HBs 参比标准品，含抗-HBs10160mIU /ml。采用四点法 或五点法。2 2 测定测定先将检品按估计效价稀释成不同倍数，使其 cpm 计数落在参比标准品直线范围内。一般 10%肌注丙种球蛋白可进行10、20、40 倍稀释。乙型肝炎免疫球蛋白可进行500、1000、2000 倍稀释。正式试验时根据预试结果调整稀释倍数。预试验用 3 个稀释倍数，正式试验用 2 个稀释倍数。2.1 各取 0.2ml 参比标准品及不同稀释倍数的检品，加入反应盘的不同孔中。预试验时每个稀释倍数检品加 1 孔，正式试验每个稀释倍数检品加 3 孔。于每孔中小心加入一个 HBsAg包被珠子，盖上密封胶纸，振荡或轻拍反应盘，排出气泡，并使珠子全部浸入液体中，置室温（1530）结合 18 小时（1620 小时）。2.2 去除胶纸，吸出孔内液体，每珠用 45ml 蒸馏水洗3 次，最后一次尽量将水吸干。2.3 于每孔中加 0.2ml125I 标记 HBsAg 试液，轻拍反应盘，排出气泡，并使珠子全部浸入液体中，盖上新的密封胶纸，置室温结合 4 小时（或 45水浴 2 小时），去除胶纸，按 2.2 项冲洗。2.4 用纸试管架将珠子从反应盘转移至塑料管中，其编号应与反应盘孔号一致。将反应管置适宜的井型 计数器中计数cpm，洗后 24 小时内均可使用。3 3 计算计算3.1 先救求出参比标准品和各稀释倍数检品的平均 cpm 计数，以参比标准品抗-HBsmIu /ml 为横座标，以 cpm 计数为纵座标在座标纸上作图，连接各点成一直线。3.2 从标准直线上查出各稀释倍数检品的 cpm 计数点，并从此点向下作一垂直线，在横座标上查出抗-HBs mIU，再乘以检品稀释倍数，除以 1000，求出 2 点或 3 点的平均值即为该检品的抗-HBs IU/ml。4 4 注意事项注意事项4.1 预试验时应按试剂盒要求做阳性和阴性对照。4.2 冰箱保存的试剂，用前应先于室温内放置 1 小时。4.3 使用不能自动减本底的 计数器时，应减本底后再计算。4.4 所有测定操作应遵守同位素实验室安全防护制度。