温州医学院 临床免疫学检验系列 (15).ppt

第十二,第十一章固相膜免疫分析技术,温州医科大学检验医学院王彩虹,概念,固相膜免疫分析技术是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可以通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶或胶体金等标记抗体（抗原），通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。,微孔膜的特点,多孔性非共价键高度吸附抗体或抗原易于漂洗,固相NC膜,常用固相膜免疫测定种类,胶体金免疫技术斑点酶免疫吸附试验免疫印迹法,第一节胶体金免疫技术,胶体金免疫技术是以胶体金作为示踪物的一种标记免疫学技术。该技术与膜载体配合，可形成特定的测定模式，用于定性的快速免疫检测。,一、胶体金,胶体金（colloidalgold）是金盐（HAuCl4）被还原成金原子后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核及外层的双离子层构成，由于静电作用，颗粒之间相互排斥而呈稳定的胶体状态。大量的胶体金颗粒聚集后可出现肉眼可见的红色斑点。,胶体金,优质,劣质,二、免疫金,免疫金（immunogold）是指胶体金与抗原或抗体的结合物。,穿流斑点金免疫渗滤试验横流斑点金免疫层析试验,三、方法学种类,（一）斑点金免疫渗滤试验（DIGFA）,渗滤装置,红色斑点,检测原理-双抗体夹心法,待测标本,免疫金,洗涤液,（）斑点金免疫层析试（DICA）,DICA是将胶体金标记技术和蛋白层析技术相结合的以NC膜为载体的快速固相膜免疫分析技术,检测原理双抗体夹心法,结果判断,阳性,阴性,无效,TC,结果判断：在T区出现红色条带为阴性，无颜色为阳性；C区出现红色条带为质控条带。,竞争法测小分子抗原,为了消除待测血清标本中大量的非特异性IgG与特异性IgG竞争结合金标记抗人IgG，降低了试验敏感性，胶体金间接免疫层析法测抗体常设计成反流免疫层析法。,间接法测抗体,有色染料,临床应用及评价,该技术具有操作简便、快捷以及操作人员不需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定，便于保存等特点，因此特别符合“床边检验”的要求。本法灵敏度不及酶标法，在临床应用中应引起高度重视。该技术不能准确定量，只能作为定性或半定量试验，目前主要应用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体以及毒品类药物等）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如HCG等）的检测。,第二节其他膜载体免疫分析技术,一、斑点酶免疫吸附试验Dot-ELISA,技术要点抗原包被膜抗原抗体反应显色反应,方法学评价,灵敏度较ELISA高6-8倍试剂用量较ELISA节约10倍操作简单，不需特殊设备条件吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存（-20可达半年）,二、免疫印迹法（IBT）,IBT是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫标记技术相结合的技术，具有分析容量大、敏感性高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,技术要点,SDS-PAGE电泳电转移酶免疫定位,