实验五 细胞基因组DNA的制备及其浓度的测定.doc

实验五 细胞基因组DNA的制备及其浓度的测定细胞/细菌/酵母基因组DNA小量提取试剂盒 上海莱枫生物科技有限公司（LifeFeng）教室准备：1 每间教室各10份（共30份）Buffer CS 150lBuffer CL 300l蛋白酶K 5l无水乙醇 250lDNA吸附柱-C30 1只收集管 3只Buffer WAG 500lBuffer WB1 1000lTBS（pH7.4） 11mlTE（pH8.0） 50l0.3ml抽提缓冲液 2.5ml胰RNase（10mg/ml） 5l蛋白酶K（20mg/ml） 15lTrisCl平衡酚（pH8.0） 3ml平衡酚/氯仿（等体积混匀） 6ml无水乙醇 7ml70乙醇 1.5mlddH2O 100500l20、100、1000ml加样枪*320、100、1000ml Tip枪头*2一次性手套*2胶头*2洗耳球*1镊子*1卷纸*1废液盆*1废物桶*1饭盒：15ml塑料离心管*510ml移液管*7大口径滴管*5滴管*31.5ml Eppendorf管*22 每间教室各1份（共2份）低温15ml离心机*1低温1.5ml离心机*137水浴锅（内有15ml离心管架*20孔）5070水浴锅（内有15ml离心管架*20孔）讲台上：饭盒（内含15ml塑料离心管、10ml移液管、大口径滴管、滴管、1.5ml Eppendorf管*若干备用）10、20、100、1000ml加样枪*410、20、100、1000ml Tip枪头*3ddH2O（与分装时用的为同一瓶）*1瓶TBSTE抽提缓冲液胰RNase（10mg/ml）蛋白酶K（20mg/ml）TrisCl平衡酚（pH8.0）平衡酚/氯仿（等体积混匀）无水乙醇70乙醇911室准备：第二周用1cm光径、500l/1000l石英比色杯*8ddH2O洗瓶*175酒精洗瓶*1紫外分光光度计*1ddH2O（与分装时用的为同一瓶）*1瓶废液盆*1卷纸*11.5ml Eppendorf管*35备注：周二（4.20） 基础医学班共10组，需HL60细胞11瓶周五（4.23） 硕士班共20组，需HL60细胞21瓶试剂配制：1TBS（Tris缓冲盐溶液）：NaCl 8gKCl 0.2g 溶于800ml ddH2O，用HCl调pH值至7.4，加ddH2O定容至1L，Tris碱 3g 分装后15磅20分钟高压灭菌，室温保存。2TE（pH8.0）：10mM TrisCl（pH8.0）；1mM EDTA（pH8.0）1M Tris（pH8.0） 10ml 0.5M EDTA（pH8.0） 2ml 加ddH2O至1L。3抽提缓冲液（不含胰RNA酶）：10mM TrisCl（pH8.0）；0.1M EDTA（pH8.0）；0.5 SDS1M Tris（pH8.0） 1ml0.5M EDTA（pH8.0） 20ml 加ddH2O至100ml。10 SDS 5ml41TAE：0.04M Tris-乙酸；0.001M EDTA50TAE 20mL，加水定容至1L51M Tris（pH8.0）：121.1g Tris碱溶于800ml ddH2O中，加入浓HCl 42ml调节pH值至8.0，溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加ddH2O定容至1L，分装后高压灭菌。60.5M EDTA（pH8.0）：186.1g EDTA-2Na2H2O加入800ml ddH2O中，磁力搅拌器剧烈搅拌，用NaOH（约需20g）调节溶液的pH值至8.0，加ddH2O定容至1L，分装后高压灭菌。710 SDS：10g电泳级SDS溶于90ml ddH2O中，加热至68助溶，加入几滴浓HCl调节溶液的pH值至7.2，加ddH2O定容至100ml，备用。850TAE：242g Tris碱57.1ml冰乙酸 加ddH2O定容至1L。100ml 0.5M EDTA（pH8.0）