抗球蛋白实验讲稿.ppt

关于抗球蛋白实验第一页，讲稿共十八页哦前 言1908年，Carlo Moreschi首先描述该试验。1945年，Coombs、Mourant和Race建立了抗球蛋白试验方法,故该试验又称为Coombs试验。第二页，讲稿共十八页哦前 言 抗球蛋白试验中球蛋白指IgG、C3片段、C4片段、IgM、IgA等，但主要指IgG和C3片段。IgG型抗体与红细胞表面相应抗原结合后致敏，但不产生可见的凝集反应，属不完全抗体。IgG具有很好的免疫原性，用其免疫动物（或通过杂交瘤技术）可获得相应抗体，即抗IgG（亦称抗抗体）。第三页，讲稿共十八页哦第四页，讲稿共十八页哦抗球蛋白试验原理待检红细胞（表面可能包被有IgG或C3片段等球蛋白）待检血清（可能含有IgG等球蛋白）已知抗原的红细胞待检红细胞（表面未知 的抗原）已知抗体 的血清产生可见凝集反应为阳性，否则为阴性。抗球蛋白血清（广谱和或单价）桥联作用桥联作用致敏致敏第五页，讲稿共十八页哦分 类直接抗球蛋白试验：检测红细胞表面是否结合IgG、C3片段等免疫球蛋白。间接抗球蛋白试验：检测血清中是否含有IgG等免疫球蛋白。第六页，讲稿共十八页哦直接抗球蛋白试验检测红细胞上抗体（不完全抗体）：第七页，讲稿共十八页哦试 剂抗人球蛋白血清，分两类：广谱为抗IgG抗C3抗体，单价分别为抗IgG抗体、抗C3抗体。不完全抗D血清（IgG型）。AB型血清。5%RhD阳性红细胞悬液（3个人O型红细胞洗涤后制备）。第八页，讲稿共十八页哦操作步骤 1、取受检查红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，再配成5%红细胞盐水悬液(尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰)。2、取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，移入试管（10mm60mm）内，加抗球蛋白血清1滴，混匀。第九页，讲稿共十八页哦操作步骤 3、阳性对照：用不完全抗D血清致敏的5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。4、阴性对照：正常人5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。5、受检者以及阳性、阴性对照管同时以 1000rpm离心1min，轻轻摇动，观察结果。第十页，讲稿共十八页哦间接抗球蛋白试验检测血清中抗红细胞抗体（不完全抗体）：第十一页，讲稿共十八页哦操作步骤反应物反应物受检管受检管阳性对照阳性对照阴性对照阴性对照血清（已知或受血清（已知或受检）检）2 2滴滴-5%5%红细胞悬液红细胞悬液（受检或已知）（受检或已知）1 1滴滴-IgGIgG抗抗D D血清血清-2 2滴滴-ABAB型血清型血清-2 2滴滴5%5%阳性红细胞悬阳性红细胞悬液液-1 1滴滴1 1滴滴第十二页，讲稿共十八页哦操作步骤 1、取3支试管，按上表分别加入相应的细胞、血清和试剂，混匀，置37水浴1h（致敏），用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去（尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰）。每管再各加生理盐水1滴，混匀。2、每管各加适当浓度抗球蛋白血清1滴（桥联），混匀，1000rpm离心1min，观察结果。第十三页，讲稿共十八页哦结果判读阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，不凝集者为阴性。如阳性对照出现红细胞不凝集或阴性出现红细胞凝集结果，应分析原因重做。第十四页，讲稿共十八页哦 注意事项离心过度，红细胞不易散开，容易导致假阳性。红细胞洗涤时应迅速、连续，不应中途停止。标本采集后最好立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失（直抗）。抗球蛋白血清严格按说明书使用，否则可产生前带反应和后带反应，而误为阴性结果。第十五页，讲稿共十八页哦注意事项红细胞上吸附抗体过少或Coombs试验阴性自身免疫性溶血性贫血直抗试验可呈假阴性反应。全凝集或冷凝集血标本及脐带血标本含有Wharton胶，且洗涤不充分；血液标本中有很多网织红细胞，且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集，出现假阳性。阴性结果应核实：在试管中再加1滴IgG致敏红细胞，若阳性则表示试管内的抗球蛋白试剂确未被消耗，结果可靠。第十六页，讲稿共十八页哦抗球蛋白试验临床应用新生儿溶血病（HDN）：胎儿红细胞已被母亲血型抗体（能通过胎盘的IgG型）致敏时。自身免疫性溶血性贫血（AIHA）：自身抗体吸附在自身红细胞表面时。溶血性输血反应：输入红细胞被受者不完全抗体致敏时。药物性溶贫：甲基多巴类药物、青霉素等产生的不完全抗体吸附于红细胞时。第十七页，讲稿共十八页哦2022/10/7感谢大家观看第十八页，讲稿共十八页哦