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基因诊断 Gene detection 基因诊断 运用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化，从而对疾病作出的诊断，称为分子诊断，又叫基因诊断。基因诊断的材料包括：DNA，RNA与蛋白质。基因诊断的基本原理 基因诊断的基本特点 基因诊断的技术与应用 核酸分子杂交 RFLP技术 PCR相关技术 加热加热 加碱加碱 变性变性 缓慢缓慢 降温降温 复性复性 或退火或退火 加入探针加入探针 基因诊断原理 基因诊断的特点 1.以特定基因为目标，检测基因的突变和表达信息，特异性强；2.采用分子杂交技术和PCR技术具有信号放大作用，微量样品即可进行诊断，灵敏度高；3.可用于尚无出现临床表现前、胎儿的出生前诊断，应用广泛；4.检测样品获得便利，不受个体发育阶段性和基因表达组织特异性的限制。一、核苷酸探针杂交相关技术（nucleic acid probe)基因诊断的技术与应用 1.Southern Blot 2.ASO 3.Genechip 探针（Prober）:是指一段被标记了的、特定的核苷酸序列(DNA/RNA)，用于杂交筛查鉴定被测DNA或RNA分子。探针的特性 1.应带有标记 2.探针应为单链 3.具有高度特异性 4.探针的序列应选择基因编码序列 探针 标记物 标记探针 靶核酸 杂交体 1.Southern Blot 1.基因组DNA 2.用限制酶消化 3.凝胶电泳分离 变性 5.探针杂交 6.放射自显影 4.滤膜转印DNA Southern Blot 是指将待测核酸分子结合到一定的固相支持物上的方法。例.Southern blot 技术的应用 2.等位基因特异性寡核苷酸杂交法（allele-specific oligonucleotide,ASO)根据已知基因突变位点的碱基序列，设计和制备与野生型或突变型基因序列互补的两种探针，分别与被检测样品中的DNA分子进行杂交，根据样品与两种探针杂交信号的强弱，确定是否存在基因突变，判断检测者是基因突变的纯合体或杂合体。异常探针 T A G 正常人 患者 DNA DNA 正常人 患者 DNA DNA 杂交结果 点杂交 正常探针 G A G 正常人 患者 DNA DNA 杂交结果 正常人 患者 DNA DNA 点杂交 等位基因特异的寡核苷酸探针(ASO)例 ASO斑点杂交 1986年，胡流清等基于点突变原理，用寡核苷酸探针进行基因诊断。正常探针 突变探针 PKU，AR 1 2 1 2 1 2 3 4 1 2 3 4 3.基因芯片技术（genechip)基因芯片是指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过激光共聚焦显微镜对芯片进行扫描，经计算机系统分析处理所得资料，可对上千种基因的表达水平、突变和多态性进行快速、准确的检测。1.由于同时将大量探针固定于支持物上，所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析，操作简便、自动化程度高、检测效率高。2.通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值，如基因表达谱测定、突变检测、多态性分析、基因组文库作图及杂交测序等。基因芯片技术的特点 THANK YOU