食用菌母种.ppt

实验一实验一 食用菌母种的制作技术食用菌母种的制作技术 植物科学学院植物科学学院一、一、实验目的实验目的v 1 1、学习食用菌培养基的配方与制作方法、学习食用菌培养基的配方与制作方法v 2 2、掌握培养基的消毒与灭菌，母种移接的操、掌握培养基的消毒与灭菌，母种移接的操 作技术和方法。作技术和方法。二二 实验材料实验材料v 超净工作台、电热恒温培养箱超净工作台、电热恒温培养箱、玻璃漏斗、漏斗架、玻璃漏斗、漏斗架、铝锅、电炉铝锅、电炉1 000 1 000 rnJrnJ量杯、纱布、棉塞、量杯、纱布、棉塞、18mm180 mm18mm180 mm试管、细线绳、牛皮纸、刀、马铃试管、细线绳、牛皮纸、刀、马铃薯、葡萄糖或蔗糖、琼脂、酒精灯、薯、葡萄糖或蔗糖、琼脂、酒精灯、7575酒精消毒酒精消毒瓶、瓶、7575酒精消毒棉瓶、接种针、火柴、记号笔。酒精消毒棉瓶、接种针、火柴、记号笔。三、实验内容与方法三、实验内容与方法v常用配方：常用配方：v 1 1、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA(PDA培养基培养基)：v马铃薯马铃薯(去皮去皮)100 g)100 g，蔗糖蔗糖10 g10 g，琼脂琼脂9 910 g10 g，水，水500ml500ml，pHpH自自然。然。v 2 2、马铃薯综合培养基：马铃薯、马铃薯综合培养基：马铃薯(去皮去皮)100 g)100 g，蔗糖，蔗糖10 g10 g，琼脂，琼脂9 910 g10 g，硫酸镁，硫酸镁0.8g,0.8g,磷酸二氫钾磷酸二氫钾1.5g1.5g，水，水500ml500ml，pHpH自然自然配配 制制 方方 法法v 1 1、先将马铃薯洗净，去皮，挖掉芽眼，称取、先将马铃薯洗净，去皮，挖掉芽眼，称取100 g100 g，切成切成1cm1cm见方的小块或薄片。见方的小块或薄片。v 2 2、将切好的马铃薯块放人铝锅内或大烧杯中，加水、将切好的马铃薯块放人铝锅内或大烧杯中，加水500 500 mLmL放在电炉上煮沸后维持放在电炉上煮沸后维持151520min20min，至马铃薯熟而不烂。至马铃薯熟而不烂。v 3 3、用、用4 4层湿纱布层湿纱布(纱布需浸水后拧干纱布需浸水后拧干)过滤，由于马铃薯在煮过滤，由于马铃薯在煮沸过程中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加沸过程中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加水补足水分至水补足水分至500 500 mLmL。v4 4、将称好的琼脂加人马铃薯汁中，在电炉用文水煮，直至琼将称好的琼脂加人马铃薯汁中，在电炉用文水煮，直至琼脂完全融化为止脂完全融化为止(边煮边搅拌边煮边搅拌)。最后加入蔗糖等可溶性物质，。最后加入蔗糖等可溶性物质，搅匀。搅匀。v5 5、分装试管，培养基配好后应趁热用分装漏斗分装试管，培养基配好后应趁热用分装漏斗进行分装试管，装入试管高度的进行分装试管，装入试管高度的1 15 51 14 4，分，分装时应注意不得使培养基黏在试管的口壁上，以装时应注意不得使培养基黏在试管的口壁上，以防污染杂菌。防污染杂菌。v6 6、塞棉塞，培养基分装完以后应立即塞上大小合、塞棉塞，培养基分装完以后应立即塞上大小合适的棉塞，棉塞应塞人试管内适的棉塞，棉塞应塞人试管内2 23 3，外留，外留l/3l/3。7 7、扎把，将塞好棉塞的试管扎把，将塞好棉塞的试管7 7支或支或9 9支扎成一把，支扎成一把，在棉塞外面包一层牛皮纸，再用线绳扎紧，防止在棉塞外面包一层牛皮纸，再用线绳扎紧，防止灭菌时棉塞被冷凝水浸湿。灭菌时棉塞被冷凝水浸湿。配配 制制 方方 法法灭灭 菌菌 1、先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直立放人内锅，试管口向上且不要贴锅边，避免冷立放人内锅，试管口向上且不要贴锅边，避免冷凝水浸人试管。灭菌物品不要装得太满，留出一凝水浸人试管。灭菌物品不要装得太满，留出一定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。v2 2、盖上锅盖，盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插、盖上锅盖，盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插人锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的人锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的螺丝，并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。螺丝，并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。v3 3、将灭菌锅加热，当锅内蒸汽大量排出时再继、将灭菌锅加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽续排汽3 35 min,5 min,关闭放气阀。关闭放气阀。v 4 4、当压力表指针指到当压力表指针指到0.1-0.15Mpa 0.1-0.15Mpa 处时处时(灭菌所需压强灭菌所需压强)开始计时，开始计时，继续维持该压强继续维持该压强202030min30min。灭菌结束待压力表指针自然回到灭菌结束待压力表指针自然回到“0”0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到表未到“0”0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。成以后菌种的污染。v 5 5、摆斜面，试管取出后一定要趁热摆斜面，将试管斜放在木板上摆斜面，试管取出后一定要趁热摆斜面，将试管斜放在木板上，使试管内培养基成一斜面。斜面的长度一般为试管长度的使试管内培养基成一斜面。斜面的长度一般为试管长度的3 35 5。用。用于保藏菌种的试管斜面应适当短些，以减少蒸发面积。气温较低时，于保藏菌种的试管斜面应适当短些，以减少蒸发面积。气温较低时，在摆好的斜面上面覆盖一条厚毛巾，以免在试管壁上产生大量水珠，在摆好的斜面上面覆盖一条厚毛巾，以免在试管壁上产生大量水珠，影响接种和培养。当培养基冷凝后，即可收起备用。影响接种和培养。当培养基冷凝后，即可收起备用。灭灭 菌菌接接 种种 和和 培培 养养v 1 1、左手平托两支试管，手指按住试管底部，外侧一支是供接种用、左手平托两支试管，手指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待接母种的试管。的菌种试管，内侧一支是待接母种的试管。v 2 2、右手拿接种针，用拇指、食指和中指握住其柄部，将接种针、右手拿接种针，用拇指、食指和中指握住其柄部，将接种针插入插入7575的酒精消毒瓶中消毒，在酒精灯火焰上灼烧接种针的顶端，的酒精消毒瓶中消毒，在酒精灯火焰上灼烧接种针的顶端，逐渐将杆部也在火焰上慢慢通过，这样反复逐渐将杆部也在火焰上慢慢通过，这样反复3 3次即可将接种针彻底次即可将接种针彻底灭菌，切记最后一次灼烧后不能再浸人酒精瓶中，应在火焰旁自然灭菌，切记最后一次灼烧后不能再浸人酒精瓶中，应在火焰旁自然冷却。冷却。v 3 3、将左手平托的两支试管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌、将左手平托的两支试管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌将外侧的菌种管上的棉塞拔出，再用中指和无名指拔出内侧试管口将外侧的菌种管上的棉塞拔出，再用中指和无名指拔出内侧试管口上的棉塞夹在手中上的棉塞夹在手中(不得放在桌子上或台面上不得放在桌子上或台面上)，将两支试管口迅速，将两支试管口迅速移到酒精灯火焰旁边。移到酒精灯火焰旁边。v 4 4、将烧过并冷却的接种针伸入母种试管中，在菌丝斜、将烧过并冷却的接种针伸入母种试管中，在菌丝斜面上勾取火柴头大小的一块菌丝块，迅速放到待接试管斜面上勾取火柴头大小的一块菌丝块，迅速放到待接试管斜面的中部，将试管口在火焰上烧一下，然后立即塞上棉塞。面的中部，将试管口在火焰上烧一下，然后立即塞上棉塞。v 5 5、接种完毕，再将接种针在火焰上灼烧灭菌。以免使、接种完毕，再将接种针在火焰上灼烧灭菌。以免使接种的菌丝扩散，造成污染。接种的菌丝扩散，造成污染。v 6 6、菌种接完后。贴好标签或用记号笔在试管壁上注明、菌种接完后。贴好标签或用记号笔在试管壁上注明菌种名称及接种日期等。菌种名称及接种日期等。7 7、将同类菌种扎好，送到该菌所要求的最适温度下、将同类菌种扎好，送到该菌所要求的最适温度下(恒恒温箱或恒温室内温箱或恒温室内)培养，一般培养培养，一般培养2 d2 d，检查有无杂菌生长，检查有无杂菌生长，7 715 d15 d母种菌丝即可长满斜面。母种菌丝即可长满斜面。接种和培养接种和培养母母 种种 质质 量量 检检 查查v 通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成功。若在试管斜面上出现有光泽，黏液状培养物或呈黄、绿、灰、成功。若在试管斜面上出现有光泽，黏液状培养物或呈黄、绿、灰、黑等毛状物时，即是圬染，不能使用。优良菌种的感观应具备黑等毛状物时，即是圬染，不能使用。优良菌种的感观应具备“纯、纯、正、壮、润、香正、壮、润、香”的特点；的特点；“纯纯”指菌种的纯度高，无感染杂菌，指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑制线，无无斑块，无抑制线，无“退菌、断菌退菌、断菌”现象；现象；“正正”指菌丝生长无指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的特点；异常，具有亲本正宗的特点；“壮壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力；有力；“润润”指菌种含水量适中，无干缩、松散现象；指菌种含水量适中，无干缩、松散现象；“香香”指具指具有品种特有的香味，无异味。而菌种生产性能有品种特有的香味，无异味。而菌种生产性能(产量高低、品质优劣、产量高低、品质优劣、抗逆性强弱抗逆性强弱)的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。四、作四、作 业业v 1.1.如何获得优质的母种如何获得优质的母种?v 2.2.如何提高母种移接的成功率如何提高母种移接的成功率?实验二实验二 食用菌的组织分离技术食用菌的组织分离技术一、实验目的一、实验目的v 通过组织分离实验，使同学们掌握组织分离的通过组织分离实验，使同学们掌握组织分离的方法和技术。方法和技术。二、实验材料二、实验材料v 超净工作台、恒温箱、母种试管斜面培养基、超净工作台、恒温箱、母种试管斜面培养基、75酒精消毒棉球瓶、酒精灯、镊子、解剖酒精消毒棉球瓶、酒精灯、镊子、解剖刀刀(或或剃须刀剃须刀片片)、接种针、待分离的菇种、火柴、记号、接种针、待分离的菇种、火柴、记号笔。笔。三、实验内容与方法三、实验内容与方法v 1.选择品质优良，朵形正常、肉厚、无病虫的种菇供组选择品质优良，朵形正常、肉厚、无病虫的种菇供组织分离。分离时以幼菇织分离。分离时以幼菇(六七分成熟六七分成熟)为好，它的组织再生为好，它的组织再生能力强。此外，实践证明风干的子实体也可进行组织分离。能力强。此外，实践证明风干的子实体也可进行组织分离。v 2.分离时应在接种室或超净工作台内进行。先用酒精棉分离时应在接种室或超净工作台内进行。先用酒精棉球将手擦拭消毒，再用镊子夹取酒精棉球将菇正、反面消球将手擦拭消毒，再用镊子夹取酒精棉球将菇正、反面消毒。毒。v 3.用手将菌柄撕开，但手千万不得碰撕裂面，避免杂菌用手将菌柄撕开，但手千万不得碰撕裂面，避免杂菌污染。污染。三、实验内容与方法三、实验内容与方法v 4.将解剖刀经酒精灯火焰灭菌后，从菌柄和菌盖交界部将解剖刀经酒精灯火焰灭菌后，从菌柄和菌盖交界部位切取大豆或绿豆粒大小的组织块。以无菌操作方法，将位切取大豆或绿豆粒大小的组织块。以无菌操作方法，将切取的组织块用接种针移至母种试管斜面培养基。此外，切取的组织块用接种针移至母种试管斜面培养基。此外，用接种钩直接勾取一小块组织移至母种试管斜面培养基，用接种钩直接勾取一小块组织移至母种试管斜面培养基，分离效果也很好。分离效果也很好。v 5.塞好棉塞，注明菇种、分离日期及地点。塞好棉塞，注明菇种、分离日期及地点。v 6.放到温度适宜的温箱中培养，放到温度适宜的温箱中培养，12 d后，检查有无污后，检查有无污染，发现污染及时挑出。一般染，发现污染及时挑出。一般7lO d，菌丝即可长满斜菌丝即可长满斜面。如需纯化，再挑取尖端菌丝移接到母种试管斜面培养面。如需纯化，再挑取尖端菌丝移接到母种试管斜面培养基进行培养。基进行培养。组织分离的质量检查组织分离的质量检查v 组织分离后的试管斜面，经过组织分离后的试管斜面，经过710 d培养后，培养后，若在斜面上或组织块周围，没有任何杂菌生长，若在斜面上或组织块周围，没有任何杂菌生长，只有从组织块上长出的洁白、粗壮纯净的菌丝体，只有从组织块上长出的洁白、粗壮纯净的菌丝体，说明组织分离成功。经过再次移接，生产试验，说明组织分离成功。经过再次移接，生产试验，性状表现优良，即可做母种使用；相反，若有其性状表现优良，即可做母种使用；相反，若有其他杂菌生长，说明组织分离时消毒不彻底或无菌他杂菌生长，说明组织分离时消毒不彻底或无菌操作不严格，使得组织分离失败。操作不严格，使得组织分离失败。