微生物实验室课件.ppt

微生物实验室布局及仪器设备12GB4789.1-2016总则：2.1环境与设施2.1.1实验室环境不应影响检测结果的准确性。2.1.2实验区域应与办公区域明显分开。2.1.3实验室工作区域面积和总体布局应能满足从事检测工作需求，实验室布局应采用单方向工作流程单方向工作流程，避免交叉污染。2.1.4实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求。2.1.5食品样品检验应在洁净区域进行，洁净区域的应有明显标示。2.1.6病原微生物分离鉴定工作应在二级或以上生物安全实验室进行。23一般分为下列区域:接样室、样品保存室、培养基配制室、洁净室、生化室、培养室、仪器室和洗刷消毒室，此外还有办公室。微生物实验室的分区3445实验室核心工作间的照度不低于350 lx,其他区域照度不低于200 lx，宜采取吸顶式防水洁净照明灯。实验室的温度宜控制1826范围内。实验室的相对湿度宜控制30%70%范围内。在安全柜开启情况下，核心工作间的噪声应不大于68 dB(A)。-GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求56病原微生物分类国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：第一类 指能够引起人类或者动物非常严重疾病非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。（天花病毒）第二类 指能够引起人类或者动物严重疾病严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。（甲、乙型肝炎病毒）第三类 指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施具备有效治疗和预防措施的微生物。（沙门氏菌）第四类 指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。67微生物实验室分级 根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室安全防护水平（bio-safety level，BSL）分为14级，BSL-1防护水平最低。病原微生物病原微生物实验室实验室一类 四级 二类 三级三类（食品致病菌）二级四类 一级 二级生物安全柜生物安全柜三级78级别级别静态洁净静态洁净度级别度级别最小换最小换气次数气次数(次次/h)/h)与室外大气与室外大气压的压差值压的压差值(Pa)(Pa)与相邻区域与相邻区域压差值压差值(Pa)(Pa)温度温度相对湿相对湿度度%噪声噪声dB(A)dB(A)最低照最低照度度lx lx一级一级_ _可开窗可开窗_ _1818282870706060200200二级二级_ _可开窗可开窗_ _18182727303070706060300300三级三级7 7或或8 81212或或15153030101018182525303070706060300300四级四级7 7或或8 81212或或15156060252518182525303070706060300300微生物实验室主要技术指标-GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范89BSL-2910洁净室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台室内温度控1826，相对湿度45%65%缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。-中国药品检验标准操作规范1011洁净室分级-GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范洁净度级别洁净度级别 尘粒最大允许数尘粒最大允许数/立方米立方米 0.5m0.5m尘粒数尘粒数5m5m尘粒数尘粒数微生物最大允许数微生物最大允许数浮游菌浮游菌/立方米立方米沉降菌沉降菌/皿皿100级3,50005110,000级350,0002,0001003100,000级3,500,00020,00050010300,000级10,500,00060,0001000151112无菌室的管理无菌室在使用前和使用后应进行有效的消毒。无菌室的消毒效果应至少每两周验证一次。应制定清洁、消毒、灭菌、使用和应急处理程序。应建立环境监测结果，并归档保存。不符合规定时应立即停止使用。1213微生物实验室的消毒处理方法 1 紫外线消毒在室温2025时，220V 30W 波长253.7nm紫外线辐射强度应70W/cm2，低于此值时应更换。适当数量的紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥。在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时间应30min，室内温度20或40、相对湿度60%时，应适当延长照射时间。用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。人员在关闭紫外灯后至少30min方可入内操作。按照ISO18953的规定，评价紫外线的消毒与杀菌效果。1314微生物实验室的消毒处理方法 2 无菌室臭氧消毒封闭无菌室内，无人条件下，采用20mg/m3浓度的臭氧，作用时间应30min。消毒后臭氧浓度0.2mg/m3时方可入内操作。按照GB/T18202的规定，检测室内臭氧浓度。1415微生物实验室的消毒处理方法 3 甲醛熏蒸 40%甲醛溶液加高锰酸钾。配制的量：每m3需甲醛10ml，高锰酸钾5g。最好的条件是温度为2440,湿度在65%以上。房间熏蒸消毒时间为12小时以上，消毒结束后打开门窗通风。对居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3，可对熏蒸后的空间进行检测。1516GB4789.1-2016总则：2.3 实验设备2.3.1实验设备应满足检验工作的需要，常见设备见A.1。2.3.2实验设备应放置于适宜的环境条件下，便于维护、清洁、消毒与校准，并保持整洁与良好的工作状态。2.3.3实验设备应定期进行检查和/或检定（加贴标识）、维护和保养，以确保工作性能和操作安全。2.3.4实验设备应有日常监控记录或使用记录。1617天平最大量程：100g、120g等可读性精度：0.1mg1718精密电子稀释仪 样品量：0.5-1000g（依靠系数调整）稀释系数：2-1000液流速度：950ml/min重量误差精度：1%能够准确释放稀释液的重量。借助经过消毒的均质袋，可对样本进行准确的稀释，最大程度地减少手工接触操作，避免样品污染。1819均质机将样品和稀释液加入到无菌的均质袋中，然后将均质袋放入拍击式均质器 中，关上门即开始和完成样品的处理。拍击时间：0.199分钟。拍击速度：312次/秒实际拍击次数显示，系统自动调节拍击速度。1920电热鼓风干燥箱RT+10250；均匀度1%温度波动0.5。用于玻璃器皿等耐热物品的烤干和灭菌。玻璃器皿等物的灭菌，温度160165，灭菌2小时。2021高压灭菌锅样式大小分为手提式高压灭菌器、立式压力蒸汽灭菌器、卧式高压蒸汽灭菌器等。手提式高压灭菌器为18L、24L、30L立式高压蒸汽灭菌器从30L200L用于器皿、培养基和废气污染物的灭菌。2122灭菌锅的使用首先，检查锅内蒸馏水量是否充足，第二，检查个个阀门及开关是否工作正常。第三，将待灭菌的物品用一层牛皮纸或两层报纸包好，一定要包完整！放入锅内，物与物之间一定要有空隙。第四，盖好锅盖，螺母对称拧紧，打开放气阀，关闭阀门。第五，打开电源观察放气阀是否有蒸汽流出，确定后关闭放气阀，待压力表到达0.1-0.15kpa（温度121左右）时计时，15-30分钟，关闭开关。第六，待压力表指针归零后，打开放气阀，按对称方式打开锅盖，取出物品。注意事项:1.锅内水必须用蒸馏水或纯化水。2.锅盖螺母必须对称拧紧。3.一定要在放气阀出大量蒸汽在关闭。2223恒温水浴锅RT+599 恒温波动度 0.5 用于实验备用培养基或试剂的保温。常配置：37、42、56各一个。2324恒温培养箱控温范围：室温+565温度波动度：0.2定时范围：0999分钟用于细菌、霉菌和酵母菌的培养常配置：28、36、42、56各一个。2425 超净工作台和生物安全柜最大的区别在于送风的方式。生物安全柜是一种负压的净化工作台，正确操作生物安全柜，能够完全保护工作人员、受试样品并防止交叉污染的发生；而超净工作台只是保护操作对象而不保护工作人员和实验室环境的洁净工作台。超净工作台和生物安全柜（二级（二级A2型）型）2526电子显微镜以显微原理分类分为偏光显微镜、光学显微镜与电子显微镜和数码显微镜。常用物镜可按放大率分为低倍(4)、中倍(10或20)、高倍(40)和油浸物镜(100)。用于观察微生物的形态，便于菌种的鉴定。2627冰箱、冷冻柜用于存放商品化、分装后的培养基、试剂、菌种等。常配置：4、-20、-80各一个。2728低温高速离心机可控制转速、时间、温度和相对离心力。用于分离细胞器、病毒、核酸、蛋白质、多糖等。28THANK YOU FOR WATICHING29