2019年高中生物专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优化练习.doc

1课题课题 2 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1下列关于土壤取样的叙述，错误的是( )A土壤取样时，应选取肥沃、湿润的土壤B先铲去表层土 3 cm 左右，再取样C取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D应在酒精灯火焰旁称取土壤解析：在“分解尿素的细菌的分离与计数”实验中，必须在含微生物丰富的湿润、肥沃土壤中取样，所用小铁铲和信封必须灭菌。答案：C2用以尿素为唯一氮源加入酚红指示剂的培养基，培养尿素分解菌后，指示剂将( )A变蓝色 B变红色C变黑色 D变棕色解析：尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，会使培养基的碱性增强，pH 升高，加入酚红指示剂将变红。答案：B3测定土壤中细菌的数量一般选 104、105和 106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用 102、103和 104倍稀释液，其原因是( )A细菌个体小，真菌个体大B细菌易稀释，真菌不易稀释C细菌在土壤中的含量比真菌高D随机的，没有原因解析：细菌在土壤中的含量多于真菌，因此稀释涂布时，细菌的稀释倍数要大于真菌的稀释倍数，这样才能使平板上培养出的菌落清晰易辨。答案：C4下列能分离出分解尿素的细菌的培养基是( )AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析：要想分离尿素分解菌，应把尿素作为培养基中的唯一氮源，而 B 项中无氮源，C 项中无碳源，D 项中牛肉膏、蛋白胨都可作为氮源。答案：A5用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是( )A未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基2D接种了的选择培养基解析：将菌液稀释相同的倍数并接种，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目，因此，应选择接种菌种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循的原则是单一变量原则。答案：C6在做分离分解尿素的细菌实验时，一同学从对应稀释倍数为 106的培养基上筛选出大约150 个菌落，而其他同学只筛选出大约 50 个菌落。该同学的结果产生的原因可能有( )土样不同 培养基被污染 操作失误 没有设置对照A BC D解析：实验结果不同，最可能的原因是土样不同，其次是操作失误或培养基被污染，而与是否设置对照没有关系。答案：A7抗生素可由微生物产生，具有抑菌作用，能在琼脂培养基中扩散。在筛选产生抗生素的菌种时，先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌，在 27 下培养 3 天，形成菌落。然后接种乙、丙、丁三种致病菌(图 A)，继续在同样条件下培养 3 天，结果如图 B。分析结果，得出的结论是( )甲菌产生了抗生素丁菌的生长被丙菌产生的抗生素抑制乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制丙菌产生的抗生素抑制了乙菌的生长A BC D解析：乙、丙、丁三种致病菌不会产生抗生素，否则靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生长。从图 B 来看，乙菌的生长被抑制，最可能的原因是甲菌产生了抗生素，此种抗生素只能抑制乙菌的生长，而对丙、丁两种致病菌没有影响。答案：A8下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是( )A可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：培养基灭菌通常用的是高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他方法的物品；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基里尿素3是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌。答案：A9下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法，不正确的是( )A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中不同微生物的数量，选用的稀释范围不同C如果得到了 2 个或 2 个以上菌落数目在 30300 的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在 30300 之间适于计数的平板。土壤中不同类型的微生物的数量不同，因此在测定其数量时，选用的稀释范围也不同。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。答案：D10欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作不正确的是( )A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析：欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，同时要将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以检查培养基灭菌是否彻底；筛选分解尿素的细菌要用酚红指示剂。答案：D11下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( )AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、蒸馏水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、蒸馏水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水解析：在 A 项的培养基中既有尿素作为唯一氮源，又有其他各种成分，可以选择出分解尿素的细菌；而 C 项中缺少碳源，B 项中无尿素作氮源，D 项中有牛肉膏可提供氮源的成分。答案：A12某同学对 101、102、103倍稀释液计数的平均菌落数分别为 2 760、295 和 16，则菌落总数为(所用稀释液体积为 0.1 mL)( )A2.76×104 个/mL B2.95×105 个/mLC4.6×104 个/mL D3.755×104 个/mL解析：菌落计数法是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在 30300 之间的平板，以该平均菌落数与体积之比乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数。若所有稀释倍4数的菌落数均不在 30300 之间，则应以最接近 300 或 30 的平均菌落数进行计算。答案：B二、非选择题13下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素蒸馏水1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 mL(1)该培养基按作用划分属于_培养基，该培养基具有选择作用的原因是_。(2)若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成分是_，接种时应采用_法，该方法接种培养后的菌落，不可能是图中的_。(3)某同学用 0.1 mL 稀释液在稀释倍数为 106的平板中测得菌落数的平均值为 163，则每毫升样品中的细菌数是_。(4)从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其做进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。解析：(1)由于尿素是该培养基的唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能在上面生存，因此该培养基具有选择作用，属于选择培养基。(2)若要通过统计培养基中的菌落数来估计样品中的细菌数，应使用固体培养基，并采用稀释涂布平板法进行接种，因此需加入凝固剂如琼脂；D 为平板划线法得到的平板。(3)每毫升样品中的细菌数(C÷V)×M163÷0.1×1061.63×109。(4)尿素分解会产生氨，氨能使酚红指示剂变红，据此可以推测培养基中的尿素是否被分解。答案：(1)选择 该培养基中唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在此培养基上生长繁殖 (2)琼脂 稀释涂布平板 D (3)1.63×109 (4)酚红 红14下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有 9 mL 无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶、恒温箱。(1)方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在_操作。制备土壤稀释液：取土样 10 g 加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸5管吸取上清液 1 mL，转至盛有 9 mL 的无菌水的试管中，依次稀释到 107稀释度。涂布：按照由 103107稀释度的顺序分别吸取 0.1 mL 进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个平板。培养：放入恒温箱内，在 2830 下培养 34 d。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。如果测定的平均值为 50，则每克样品中的菌株数是_。(稀释度是 105)(2)预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数_(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。原因是_。解析：(1)在酒精灯火焰旁倒平板，可以避免杂菌的污染。为了保证实验结果准确，一般设置 35 个平板，选择菌落数在 30300 的平板进行计数，并取平均值，则每克样品中的菌株数为(50÷0.1)×1055×107个。(2)牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合土壤中几乎所有细菌生存，所以它比无氮培养基上的菌落数目多。答案：(1)酒精灯火焰旁 3 1 30300 5×107 (2)多于 无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌能生存繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存15在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行_处理。(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是_。(3)在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是_，有透明带菌落利用的氮源主要是_，据此可筛选出目的菌。(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株 A 和 B，然后对突变株 A 和 B 进行实验，结果如下表所示：该种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株 A 不能在一般培养基上生长的原因是_。突变株 A 和 B 混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是6_。解析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理性质来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养基是以含氮除草剂为唯一氮源的选择培养基。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明，菌落周围形成透明带是由于该除草剂被某些细菌降解导致的。(5)突变株 A 的生长依赖于营养物质甲，突变株 B 的生长依赖于营养物质乙。不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株 A 为突变株 B 提供了营养物质乙，突变株 B 为突变株 A 提供了营养物质甲。答案：(1)稀释 (2)以该除草剂为唯一氮源的固体培养基 (3)培养基中缺少这些细菌可利用 的氮源 (4)氮气 该除草剂 (5)突变株 A 缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株 A 生长 需要营养物质甲，突变株 B 可以提供；突变株 B 生长需要营养物质乙，突变株 A 可以提供