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分子荧光光谱法分子荧光光谱法基本原理基本原理一、分子荧光简介 当一种吸收物质吸收电磁辐射后跃迁到高能态，当一种吸收物质吸收电磁辐射后跃迁到高能态，它的寿命约为它的寿命约为10-1010-9秒，在一般情况下，受光激秒，在一般情况下，受光激发的粒子预系统中的其它粒子有一系列碰撞并将激发发的粒子预系统中的其它粒子有一系列碰撞并将激发能转化为热，此为能转化为热，此为无辐射跃迁无辐射跃迁。某些情况下，被电磁。某些情况下，被电磁辐射激发到高激发态的粒子很快通过碰撞失去振动能辐射激发到高激发态的粒子很快通过碰撞失去振动能到达第一电子激发态的最低振动能级，然后发射电磁到达第一电子激发态的最低振动能级，然后发射电磁辐射。辐射。通过光激发物质再发光的现象为通过光激发物质再发光的现象为荧光荧光。由此方式。由此方式得到的光谱为得到的光谱为荧光光谱荧光光谱。荧光是一种光致发光现象。荧光是一种光致发光现象。二、分子荧光的特点1.灵敏度高 单位浓度产生的信号量大，常见的最灵敏 方法，单分子测定2.选择性好 即共存组分对被测组分的干扰小。仪器分析与化学 分析相比较主要优点为选择性好。如光谱定性、定量。3.样品用量少S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越内转换振动弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外转换l l 2T2内转换振动弛豫三、荧光与结构1.跃迁类型：*的荧光效率高，系间跨越过程的速率常数小，有利于荧光的产生；2.共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移3.刚性平面结构：可降低分子振动，减少与溶剂的相互作用，故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构，荧光素有很强的荧光，酚酞却没有。四、荧光谱图五、仪器结构流程 测测量量荧荧光光的的仪仪器器主主要要由由四四个个部部分分组组成成：激激发发光光源源、样样品品池、双单色器系统、检测器。池、双单色器系统、检测器。特殊点特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。基本流程如图：基本流程如图：单单色色器器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器；光光源源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)检测器检测器：光电倍增管。