《分枝杆菌》课件.ppt

第第1414章章 分枝杆菌、分枝杆菌、放线菌与诺卡菌放线菌与诺卡菌河北医科大学河北医科大学 赵建宏赵建宏 概概 述述分枝杆菌与放线菌属放线菌目分枝杆菌与放线菌属放线菌目（Actinomycetates）分枝杆菌属（分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带是一类细长略带弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳性。弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳性。多数细菌在生长的一定时期抵抗酸多数细菌在生长的一定时期抵抗酸-醇（醇（acid-alcohol-fast），故又称），故又称抗酸杆菌（抗酸杆菌（acid-fast bacillus）放线菌（放线菌（Actinomyces）是一群在生物学特性上）是一群在生物学特性上与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、棒与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、棒状杆菌等有着亲缘关系状杆菌等有着亲缘关系放线菌是多数不致病，对人致病的主要有放放线菌是多数不致病，对人致病的主要有放线菌属和诺卡菌属。线菌属和诺卡菌属。前者为厌氧或微需氧菌，细胞壁中不含分枝前者为厌氧或微需氧菌，细胞壁中不含分枝菌酸，多引起内源性感染。菌酸，多引起内源性感染。后者为需氧菌，细胞壁中含有分枝菌酸，非后者为需氧菌，细胞壁中含有分枝菌酸，非人体正常菌群的成员，常引起外源性感染。人体正常菌群的成员，常引起外源性感染。概概 述述放线菌与诺卡菌的区别放线菌与诺卡菌的区别 特征特征 放线菌放线菌 诺卡菌诺卡菌 培养特性培养特性 厌氧或微需氧厌氧或微需氧需氧菌需氧菌35353737生长生长20202525不生长不生长 20202525或或3737均生长均生长抗酸性抗酸性 非抗酸性丝状菌非抗酸性丝状菌 弱抗酸性弱抗酸性分布分布 寄生口腔、上呼吸道、寄生口腔、上呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道胃肠道、泌尿生殖道存在外界环境如土壤存在外界环境如土壤多为腐生菌多为腐生菌感染性感染性 内源性感染内源性感染 外源性感染外源性感染代表菌种代表菌种 衣氏放线菌、龋齿放线菌衣氏放线菌、龋齿放线菌 牛型放线菌牛型放线菌 星形诺卡菌、巴西诺卡菌星形诺卡菌、巴西诺卡菌 结核分枝杆菌（结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）简称结核杆菌简称结核杆菌人和动物结核病的病原菌人和动物结核病的病原菌第一节第一节 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 MTB包括包括 人结核分枝杆菌（人结核分枝杆菌（M.tuberculosis）牛分枝杆菌（牛分枝杆菌（M.bovis）非洲分枝杆菌（非洲分枝杆菌（M.africanum）坎纳分枝杆菌（坎纳分枝杆菌（M.canettii）田鼠分枝杆菌田鼠分枝杆菌(M.microti)等等前四种对人类致病，其中人型前四种对人类致病，其中人型MTB感染率最高感染率最高一、分一、分 类类二、临床意义二、临床意义大约大约1/3的人口已感染的人口已感染MTB有有2000万活动性结核病患者万活动性结核病患者每年新发病每年新发病900万人，死于结核病万人，死于结核病300万人万人近近年年来来，AIDS的的发发病病率率上上升升，AIDS患患者者又又极极易易患患结结核核病病，结结核核病病已已成成为为威威胁胁人人类类健健康的一个严重的全球性公共卫生问题康的一个严重的全球性公共卫生问题WHO已已把把结结核核病病与与AIDS、疟疟疾疾一一起起列列为人类的最主要杀手为人类的最主要杀手二、临床意义二、临床意义二、临床意义二、临床意义(一一)所致疾病所致疾病 通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径 感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结 核为多见核为多见(二二)免疫性免疫性 有菌免疫或称传染性免疫有菌免疫或称传染性免疫 细胞免疫细胞免疫 迟发型超敏反应迟发型超敏反应 二、临床意义二、临床意义(三三)变异变异结核分枝杆菌易发生形态、菌落、生长温度、毒结核分枝杆菌易发生形态、菌落、生长温度、毒力以及耐药性的变异力以及耐药性的变异卡介苗（卡介苗（Bacillus Calmette-GurinBacillus Calmette-Gurin，BCGBCG）是有）是有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油、胆汁和马铃薯毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油、胆汁和马铃薯的培养基中经的培养基中经1313年年230230次传代而获得的减毒变异株次传代而获得的减毒变异株现已广泛用于人类结核病的防治现已广泛用于人类结核病的防治二、临床意义二、临床意义(四四)耐药性耐药性对常见抗菌药物天然耐药对常见抗菌药物天然耐药多多重重耐耐药药结结核核病病(multiple-drug(multiple-drug resistance resistance tuberculosistuberculosis，MDRTBMDRTB)是是指指对对2 2种种或或2 2种种以以上上的的抗抗结结核核药药产产生生耐耐药药性性的的结结核核菌菌感感染染。临临床床治治疗疗相相当当棘手，死亡率很高棘手，死亡率很高三、微生物学检验三、微生物学检验（一）基本特性（一）基本特性 结核分枝杆菌尚未发现产生内毒素、外毒结核分枝杆菌尚未发现产生内毒素、外毒素及侵袭性酶素及侵袭性酶致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症、代谢物质的毒性以及菌体成引起的炎症、代谢物质的毒性以及菌体成分引起的免疫损伤有关分引起的免疫损伤有关结核分枝杆菌的致病物质主要是荚膜、脂结核分枝杆菌的致病物质主要是荚膜、脂质和蛋白质质和蛋白质三、微生物学检验三、微生物学检验（二）标本采集（二）标本采集据感染部位的不同采集不同的标本据感染部位的不同采集不同的标本疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀小时尿沉淀1015ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通常需常需35份标本）份标本）采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无深部脓肿用无菌注射器抽取送检菌注射器抽取送检其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取凝块作涂片或接种培养凝块作涂片或接种培养三、微生物学检验三、微生物学检验（三）（三）标本直接检查标本直接检查 1.形态学检查形态学检查 （1）直接涂片染色镜检）直接涂片染色镜检 （2）浓缩集菌涂片检查法）浓缩集菌涂片检查法 2.核酸检测核酸检测 形态学检查形态学检查齐齐-尼染色（尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是）是常用的抗酸染色法，染色后结核分枝杆菌常用的抗酸染色法，染色后结核分枝杆菌呈红色，背景呈蓝色呈红色，背景呈蓝色形态学检查形态学检查用荧光染料金胺用荧光染料金胺“O”染色，在荧光显微镜染色，在荧光显微镜下菌体呈橘黄色下菌体呈橘黄色 涂片镜检的报告方式涂片镜检的报告方式半定量报告半定量报告石炭酸复红染色：抗石炭酸复红染色：抗酸杆菌（酸杆菌（10001000）荧光染色：抗酸荧光染色：抗酸杆菌杆菌（450450）未找到抗酸菌未找到抗酸菌可疑抗酸杆菌；可疑抗酸杆菌；再送标本检测再送标本检测0 01 12/3002/300视野视野0 01 12/702/70视野视野1 11 19/1009/100视野视野2 218/5018/50视野视野2 21 19/109/10视野视野4 436/1036/10视野视野3 31 19/9/视野视野4 436/36/视野视野4 49/9/视野视野36/36/视野视野用用PCRPCR法快速诊断法快速诊断MTBMTB感染感染PCRPCR法检测法检测DNADNA特异性更强，敏感性更高特异性更强，敏感性更高PCRPCR须须按按法法规规要要求求规规范范操操作作，应应防防止止标标本本污污染染出出现现假性结果假性结果核酸检测核酸检测三、微生物学检验三、微生物学检验（四）（四）分离培养与鉴定分离培养与鉴定 1.培养特性培养特性 专性需氧专性需氧35CO2能促进其生长能促进其生长营营养养要要求求高高:须须在在含含血血清清、卵卵黄黄、马马铃铃薯薯、甘甘油油以以及及含含某某些些无无机机盐盐类类的的特特殊殊培培养养基上才能生长良好。常用罗氏培养基基上才能生长良好。常用罗氏培养基最适生长温度为最适生长温度为3537，最适，最适pH6.56.81418h分裂分裂1次，在固体培养基上次，在固体培养基上25周才出现肉眼可见的菌落周才出现肉眼可见的菌落典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样2.2.分离培养分离培养标本接种于选择性培养基中标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所常用罗氏，所含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长)3737，5 51010COCO2 2培养培养8 8周周结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落涂片染色为抗酸阳性涂片染色为抗酸阳性Bactec TB 960快速培养系统快速培养系统3D-120型三、微生物学检验三、微生物学检验（四）（四）分离培养与鉴定分离培养与鉴定 3.菌种鉴定菌种鉴定 (1)(1)生化反应生化反应 （2 2）噬菌体鉴定法）噬菌体鉴定法 （3 3）分子生物法菌种鉴定）分子生物法菌种鉴定 (4)(4)高效液相色谱（高效液相色谱（HPLCHPLC）检测分枝菌酸）检测分枝菌酸 生化反应生化反应-烦琐、费时（烦琐、费时（48 周）周）,影响因素多影响因素多结核分枝杆菌不发酵糖类结核分枝杆菌不发酵糖类能产生触酶能产生触酶人型人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受噻吩噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型羧酸酰肼，而牛型MTB则不能则不能人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无毒株则为阴性，并失去索状生长现象毒株则为阴性，并失去索状生长现象噬菌体鉴定法（噬菌体鉴定法（PhaB）Wilson 等于等于1997年建立的快速检测新技术年建立的快速检测新技术 原理：是分枝杆菌噬菌体原理：是分枝杆菌噬菌体D29能感染活的分能感染活的分枝杆菌枝杆菌,未进入感染菌体内的噬菌体被随后加未进入感染菌体内的噬菌体被随后加入的杀毒剂灭活入的杀毒剂灭活,已进入菌体内的噬菌体不已进入菌体内的噬菌体不受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖,并并将菌体裂解将菌体裂解,释放出的子代噬菌体可感染随释放出的子代噬菌体可感染随后加入的指示细胞后加入的指示细胞,并将其裂解并将其裂解,在琼脂平板在琼脂平板上出现透亮的噬菌斑。上出现透亮的噬菌斑。分子生物法菌种鉴定分子生物法菌种鉴定PCR 限制性片段长度多态性分析（限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）PCR单链构象多态性分析（单链构象多态性分析（PCR-SSCP）核酸探针核酸探针核酸序列分析核酸序列分析多重多重PCR高效液相色谱（高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸：由于不同种的分枝杆菌细检测分枝菌酸：由于不同种的分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC检检测分枝菌酸可鉴定菌种。测分枝菌酸可鉴定菌种。三、微生物学检验三、微生物学检验（五）（五）免疫学诊断免疫学诊断 1 1结核菌素试验结核菌素试验 2 2结核分枝杆菌抗原检测结核分枝杆菌抗原检测 3.3.结核分枝杆菌抗体检测结核分枝杆菌抗体检测 4.4.全血干扰素测定法全血干扰素测定法 结核菌素试验结核菌素试验针对旧结核菌素针对旧结核菌素(OT)(OT)与结核菌素纯蛋白衍生物与结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)(PPD)两种菌体蛋白两种菌体蛋白原理：当将蛋白注入皮内后，如受试者已感染原理：当将蛋白注入皮内后，如受试者已感染结核杆菌，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结核杆菌，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发性超敏结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发性超敏反应性炎症，若受试者未感染反应性炎症，若受试者未感染MTBMTB则无反应。则无反应。结核分枝杆菌抗原检测结核分枝杆菌抗原检测用用ELISA 方法在血清中检测结核分枝杆菌方法在血清中检测结核分枝杆菌抗原抗原-结核菌外分泌特异性抗原结核菌外分泌特异性抗原(external secreted specific antigen)浓度。浓度。任何体液如血液、痰液、脊髓液、尿液和任何体液如血液、痰液、脊髓液、尿液和各式组织萃取液等体液可用于检测特异蛋各式组织萃取液等体液可用于检测特异蛋白抗原。白抗原。结核抗体结核抗体作为活动性作为活动性MTB感染的快速诊断方法之一感染的快速诊断方法之一比传统的痰涂片抗酸染色、比传统的痰涂片抗酸染色、MTB培养等方法简便、培养等方法简便、快速、敏感性高，但存在一定的假阳性。快速、敏感性高，但存在一定的假阳性。近年，胶体金、蛋白芯片检查结核杆菌近年，胶体金、蛋白芯片检查结核杆菌IgG抗体抗抗体抗体，特别是后者，针对三种抗原（脂阿拉伯甘露体，特别是后者，针对三种抗原（脂阿拉伯甘露糖、糖、38K Da和和16K Da蛋白质抗原），其灵敏度蛋白质抗原），其灵敏度和特异性均有所提高。和特异性均有所提高。全血干扰素测定法全血干扰素测定法原理：当全血与原理：当全血与PPDPPD和对照抗原（植物血凝素）共同和对照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-IFN-，通过检测，通过检测IFN-IFN-的含量来鉴定菌种。的含量来鉴定菌种。20042004年，年，Quantiferon-TB Gold assay Quantiferon-TB Gold assay 问世，应用问世，应用结核分枝杆菌结核分枝杆菌RD1RD1区域编码的早期分泌抗原靶区域编码的早期分泌抗原靶（ESATESAT）和培养滤液蛋白（）和培养滤液蛋白（CFP-10CFP-10）特异抗原刺激）特异抗原刺激细胞检测。细胞检测。近来近来ESAT/CFP-10ESAT/CFP-10融合蛋白融合蛋白-ELISPOT-ELISPOT用于诊断活动性用于诊断活动性结核病，准确、灵敏、特异、快速。结核病，准确、灵敏、特异、快速。结果与结核菌素试验相当，干扰因素小。结果与结核菌素试验相当，干扰因素小。（六）药物敏感性试验（六）药物敏感性试验将将纯纯培培养养物物菌菌悬悬液液，接接种种含含各各种种浓浓度度药药物物的的固固体体培养基上，同时做不含药物的对照组。培养基上，同时做不含药物的对照组。经经过过培培养养，含含有有药药物物的的培培养养基基上上菌菌落落数数目目是是对对照照组组的的7575以以上上，则则认认为为该该菌菌对对该该药药物物浓浓度度为为完完全全耐药，如无菌落生长则为敏感。耐药，如无菌落生长则为敏感。三、微生物检验三、微生物检验第二节第二节 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 一、概述与分类一、概述与分类 二、二、临床意义临床意义 三、微生物学检验三、微生物学检验一、概述与分类一、概述与分类 非结核分枝杆菌（非结核分枝杆菌（ontuberculosis ontuberculosis MycobactericumMycobactericum，NTMNTM）:指结核分枝杆菌复合群指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分枝杆菌枝杆菌)和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。NTM种类众多，现已被鉴定的有种类众多，现已被鉴定的有150余种余种,包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。国际分枝杆菌分类研究组（国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）分为）分为三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能培养菌三种类型。培养菌三种类型。Runyon按细菌产色素和生长速度将临床重按细菌产色素和生长速度将临床重要分枝杆菌分为要分枝杆菌分为Runyon、群群 概概 述述Runyon Runyon 分类法分类法群群光产色菌光产色菌,如猿猴分枝杆菌、堪萨斯分枝杆如猿猴分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌菌、海分枝杆菌;群群暗产色菌暗产色菌,如苏加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆如苏加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌菌、瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌;群群不产色菌不产色菌,如鸟分枝杆菌复合群如鸟分枝杆菌复合群(M1avium(M1avium complex,MAC)complex,MAC)、玛尔摩分枝杆菌、土地分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌、土地分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、嗜血分枝杆菌溃疡分枝杆菌、嗜血分枝杆菌;群群快生长菌快生长菌,如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌。脓肿分枝杆菌。二、临床意义二、临床意义迄今为止已发现迄今为止已发现NTMNTM有有150余种，其中约余种，其中约1/3与人类疾病有关。与人类疾病有关。条件致病菌条件致病菌 毒力低于毒力低于结结核分枝杆菌核分枝杆菌 自然界中广泛存在自然界中广泛存在 可以在人体某些部位定植可以在人体某些部位定植结核病和结核病和NTM感染的治疗不同感染的治疗不同 为何要关注为何要关注NTM？自然界中广泛存在，如水、土壤和气溶胶，自然界中广泛存在，如水、土壤和气溶胶，可可导导致免疫力低下的患者感染。致免疫力低下的患者感染。近年来，因手近年来，因手术术器械、注射器具及医器械、注射器具及医疗疗用水用水等等灭灭菌不合格、使用不菌不合格、使用不规规范造成患者手范造成患者手术术切切口、注射部位口、注射部位NTMNTM感染暴感染暴发发事件。事件。如：广东省某中心卫生院剖宫如：广东省某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件。产患者手术切口感染事件。该事件是由于手术器械灭菌不该事件是由于手术器械灭菌不合格导致的手术切口感染，合格导致的手术切口感染，病病原菌为快速生长型分枝杆菌。原菌为快速生长型分枝杆菌。警钟长鸣警钟长鸣NTM潜在杀手？潜在杀手？卫生部关于严重医院感染事件通报卫生部关于严重医院感染事件通报 1.关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报2.卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报 3.关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报 4.关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报 5.关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报6.卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报7.关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的通报通报 摘自江苏省卫生厅摘自江苏省卫生厅严重医院感染事件通报与处罚规定选编严重医院感染事件通报与处罚规定选编（2010年年7月）月）光产色分枝杆菌（光产色分枝杆菌（Runyon 群）群）堪萨斯分枝杆菌（堪萨斯分枝杆菌（M.kansaii）：能引起肺内和肺外类似）：能引起肺内和肺外类似结核样的病变结核样的病变海分枝杆菌海分枝杆菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起：存在于淡水或海水。除可引起冷血动物（如鱼）感染外，亦能引起人的感染。通过皮肤冷血动物（如鱼）感染外，亦能引起人的感染。通过皮肤微小创口侵入皮肤而引起所谓的微小创口侵入皮肤而引起所谓的“游泳池肉芽肿游泳池肉芽肿”。渔业。渔业工人可经受损皮肤遭受感染工人可经受损皮肤遭受感染猿分枝杆菌（猿分枝杆菌（M.simiae）：首先从猿分离到此菌，形态同）：首先从猿分离到此菌，形态同结核分枝杆菌，可感染人类结核分枝杆菌，可感染人类暗产色分枝杆菌（暗产色分枝杆菌（Runyon 群）群）瘰疬分枝杆菌（瘰疬分枝杆菌（M.scrofulaceum）：可引）：可引起人的淋巴结炎或肺部感染。起人的淋巴结炎或肺部感染。斯氏分枝杆菌斯氏分枝杆菌(M.szulgai)：可引起成人肺：可引起成人肺部的慢性感染。部的慢性感染。不产色分枝杆菌（不产色分枝杆菌（Runyon 群）群）鸟鸟-胞内分枝杆菌复合体胞内分枝杆菌复合体(M.avium-intracellulare complex,MAC or MAIC)：鸟分枝杆菌和胞内分：鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌有许多相似之处，故合起来称之为枝杆菌有许多相似之处，故合起来称之为MAC。近年来发现近年来发现HIV感染和感染和AIDS患者易感染患者易感染MAC。溃疡分枝杆菌（溃疡分枝杆菌（M.ulcerans）：对人可通过创伤）：对人可通过创伤局部感染，常在四肢伸侧形成无痛性溃疡，叫做局部感染，常在四肢伸侧形成无痛性溃疡，叫做Buruli溃疡，缓慢愈合或出现继发感染。溃疡，缓慢愈合或出现继发感染。蟾蜍分枝杆菌（蟾蜍分枝杆菌（M.xenopi）：是蟾蜍肉芽肿的病）：是蟾蜍肉芽肿的病原菌，对人则多引起老年男性的慢性肺部感染。原菌，对人则多引起老年男性的慢性肺部感染。快速生长分枝杆菌（快速生长分枝杆菌（Runyon 群）群）偶发分枝杆菌（偶发分枝杆菌（M.fortuitum）：可引起人的局部感染）：可引起人的局部感染或肺部感染，对现有的抗结核药物均耐药。或肺部感染，对现有的抗结核药物均耐药。龟分枝杆菌（龟分枝杆菌（M.chelonei）：该菌在引起免疫力低下患）：该菌在引起免疫力低下患者感染的快速生长非结核分枝杆菌中最常见，外伤引起的者感染的快速生长非结核分枝杆菌中最常见，外伤引起的软组织病变及手术后继发感染，亦可引起肺部感染。软组织病变及手术后继发感染，亦可引起肺部感染。脓肿分枝杆菌（脓肿分枝杆菌（M.abscessus）：以前曾作为龟分枝）：以前曾作为龟分枝杆菌脓肿亚种。常存在于自来水中，引起注射后医院感染杆菌脓肿亚种。常存在于自来水中，引起注射后医院感染的暴发。该菌也可散发引起丰胸术后、中心静脉插管、动的暴发。该菌也可散发引起丰胸术后、中心静脉插管、动脉插管以及透析导管所致的菌血症。另外，该菌可导致：脉插管以及透析导管所致的菌血症。另外，该菌可导致：近近90%由快速生长分枝杆菌引起的肺部感染，外伤后感染由快速生长分枝杆菌引起的肺部感染，外伤后感染以及超过以及超过90%鼓膜切开管植入术后耳炎。与龟分枝杆菌相鼓膜切开管植入术后耳炎。与龟分枝杆菌相似，该菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。似，该菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染难于愈合的伤口难于愈合的伤口潮湿治疗室曾导致肌肉注射感染潮湿治疗室曾导致肌肉注射感染表现：表现：19981998年年4 4月月1 1日日5 5月月3131日共手术日共手术292292例，例，4 4月月2222日日7 7月月1414日发生切口日发生切口感染感染166166例。潜伏期为例。潜伏期为20203030天。切口部位开始为小结节，继而化脓成窦道，天。切口部位开始为小结节，继而化脓成窦道，有线头挟出。清创换药后创面清洁但不愈合，或愈合后又复发，并有淋巴有线头挟出。清创换药后创面清洁但不愈合，或愈合后又复发，并有淋巴结炎倾向。结炎倾向。调查：调查：2020份切口分泌物标本培养出份切口分泌物标本培养出龟分枝杆菌（脓肿亚型）。龟分枝杆菌（脓肿亚型）。医院环境和医院环境和无菌物品细菌学检查合格。使用中和未启用的戊二醛半小时不能杀灭金葡无菌物品细菌学检查合格。使用中和未启用的戊二醛半小时不能杀灭金葡菌、菌、1 1小时不能杀灭龟分枝杆菌，测浓度为小时不能杀灭龟分枝杆菌，测浓度为0.137%0.137%。结论：戊二醛浓度错配导致手术器械分枝杆菌污染，从而引起切口感染。结论：戊二醛浓度错配导致手术器械分枝杆菌污染，从而引起切口感染。某医院手术切口分枝杆菌感染暴发某医院手术切口分枝杆菌感染暴发（广东深圳，（广东深圳，19981998）深圳孕妇感染事件开庭：深圳孕妇感染事件开庭：4646人索赔人索赔20002000多万元多万元 肌注部位偶发分枝杆菌感染暴发肌注部位偶发分枝杆菌感染暴发（福建南平，（福建南平，19981998）表现：表现：19981998年年8 8月月1111月某诊所月某诊所5959例患者发生肌注部位感染，潜伏期例患者发生肌注部位感染，潜伏期2 28080天。起初肌注无明显不适，少数针孔持续疼痛，多数在洗澡或接通知后抚天。起初肌注无明显不适，少数针孔持续疼痛，多数在洗澡或接通知后抚摸发现注射处肿块长期不消。摸发现注射处肿块长期不消。1515天约长天约长0.50.51.0cm1.0cm，后期硬块出现波动感，后期硬块出现波动感，压痛明显，出现水样脓液。继发腹股沟淋巴结炎压痛明显，出现水样脓液。继发腹股沟淋巴结炎4 4例。脓液或病理标本例。脓液或病理标本4343份份中中3333份检出份检出偶发分枝杆菌。偶发分枝杆菌。调查：调查：检查检查2727种药物、一次性注射器和输液器均合格；其他诊所肌注者无种药物、一次性注射器和输液器均合格；其他诊所肌注者无发病；诊所卫生条件差，发病；诊所卫生条件差，1 1个水龙头，自来水直接从河中抽取，未消毒；玻个水龙头，自来水直接从河中抽取，未消毒；玻璃注射器璃注射器1515枝，煮沸消毒，时间凭经验，每天消毒枝，煮沸消毒，时间凭经验，每天消毒1 1次；患者多时使用同种次；患者多时使用同种药物者换针头不换注射器。药物者换针头不换注射器。结论：污染注射器是引起感染暴发的主要原因，细菌则可能来自河水。结论：污染注射器是引起感染暴发的主要原因，细菌则可能来自河水。（一）（一）标本采集标本采集 见结核杆菌部分见结核杆菌部分（二）涂片抗酸染色（二）涂片抗酸染色 本菌为抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短而本菌为抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短而粗，大小约粗，大小约18m0.30.5m，抗酸染，抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列色着色均匀，呈束状或团状排列（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定三、微生物学检验三、微生物学检验（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定 光产色分枝杆菌（光产色分枝杆菌（Runyon 群）群）菌落特点是在暗处一般不产生或仅产生少量色素，菌落特点是在暗处一般不产生或仅产生少量色素，光照光照1h后能在后能在48h内转为黄色或橘黄色内转为黄色或橘黄色需在营养复杂的培养基上才能生长，生长缓慢，菌需在营养复杂的培养基上才能生长，生长缓慢，菌落光滑落光滑有时可形成索状生长有时可形成索状生长三、微生物学检验三、微生物学检验（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定（2）暗产色分枝杆菌（）暗产色分枝杆菌（Runyon 群）群）无论有光或无光均能产生色素，呈黄色或无论有光或无光均能产生色素，呈黄色或橘黄色橘黄色生长缓慢，菌落为光滑型生长缓慢，菌落为光滑型 三、微生物学检验三、微生物学检验（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定 不产色分枝杆菌（不产色分枝杆菌（Runyon 群）群）缺乏缺乏-胡萝卜素，故在光照和暗处均不能胡萝卜素，故在光照和暗处均不能产生色素产生色素三、微生物学检验三、微生物学检验（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定 快速生长分枝杆菌（快速生长分枝杆菌（Runyon 群）群）在普通培养基上即可生长在普通培养基上即可生长最适生长温度为最适生长温度为2545生长速度快，生长速度快，36d即可形成菌落即可形成菌落三、微生物学检验三、微生物学检验微需氧培养微需氧培养4天天三、微生物学检验三、微生物学检验（四）其他鉴定方法（四）其他鉴定方法NTMNTM非培养方法的鉴定与结核分枝杆菌类似，非培养方法的鉴定与结核分枝杆菌类似，可参考结核杆菌部分。可参考结核杆菌部分。NTMNTM的实验室诊断可跟据细菌生长速度、色的实验室诊断可跟据细菌生长速度、色素等表型特征进行初步鉴定，再进行分子素等表型特征进行初步鉴定，再进行分子诊断，后者应用越来越广泛。诊断，后者应用越来越广泛。第三节第三节 麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌 麻风病的病原菌，麻风是一种慢性传麻风病的病原菌，麻风是一种慢性传染病，主要表现为皮肤、黏膜和神经末梢染病，主要表现为皮肤、黏膜和神经末梢的损害。晚期可侵犯深部组织和器官，形的损害。晚期可侵犯深部组织和器官，形成肉芽肿。成肉芽肿。根据临床表现、免疫病理变化和细菌根据临床表现、免疫病理变化和细菌检查结果等将麻风分为瘤型、结核样型和检查结果等将麻风分为瘤型、结核样型和界限类综合征等三种病型。界限类综合征等三种病型。麻风分枝杆菌（麻风分枝杆菌（M.leprae）麻风病的病原菌麻风病的病原菌1873年挪威学者年挪威学者Armauer Hansen从麻风从麻风患者皮肤结节中发现，又名患者皮肤结节中发现，又名Hansen杆菌。杆菌。革兰染色阳性革兰染色阳性具有抗酸性具有抗酸性一、临床意义一、临床意义WHO自自1995年始对麻风患者实施免费治疗年始对麻风患者实施免费治疗麻风病发病率直线下降麻风病发病率直线下降2008年全球新发现麻风患者年全球新发现麻风患者249000例例中国现症麻风病患者由解放初期的中国现症麻风病患者由解放初期的50多万多万人减少至目前的人减少至目前的6000余人余人20012008年年,我国每年新发现患者我国每年新发现患者14001700例例 二、微生物学检验二、微生物学检验（一）基本特性（一）基本特性本菌为抗酸杆菌，较结核分枝杆菌短而粗，大小本菌为抗酸杆菌，较结核分枝杆菌短而粗，大小约约18m0.30.5m，抗酸染色着色均匀，抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列。呈束状或团状排列。麻风分枝杆菌为典型的胞内寄生菌，有麻风分枝麻风分枝杆菌为典型的胞内寄生菌，有麻风分枝杆菌存在的细胞胞浆呈泡沫状，称为麻风细胞。杆菌存在的细胞胞浆呈泡沫状，称为麻风细胞。用药后细菌可断裂为颗粒状、链杆状等，着色不用药后细菌可断裂为颗粒状、链杆状等，着色不均匀，叫做不完整菌。均匀，叫做不完整菌。革兰染色阳性，无鞭毛、无荚膜、无芽胞。革兰染色阳性，无鞭毛、无荚膜、无芽胞。二、微生物学检验二、微生物学检验（二）标本采集（二）标本采集 通常自眶上、颧下、下颌、耳廓及鼻腔黏通常自眶上、颧下、下颌、耳廓及鼻腔黏膜等数处采取标本膜等数处采取标本二、微生物学检验二、微生物学检验（三）标本直接检查（三）标本直接检查1.显微镜检查显微镜检查 用刀刮取组织液做涂片，火焰固定，抗酸染色、镜检，用刀刮取组织液做涂片，火焰固定，抗酸染色、镜检，麻风分枝杆菌呈红色，细胞呈蓝色。金胺麻风分枝杆菌呈红色，细胞呈蓝色。金胺“O”染色、染色、荧光显微镜检查，可提高阳性率荧光显微镜检查，可提高阳性率麻风分枝杆菌多呈束状或成团聚集，结核分枝杆菌多麻风分枝杆菌多呈束状或成团聚集，结核分枝杆菌多散在，偶有聚集。麻风分枝杆菌菌体粗直，两端尖细，散在，偶有聚集。麻风分枝杆菌菌体粗直，两端尖细，而结核分枝杆菌则细长略弯曲，且有分枝现象。在镜而结核分枝杆菌则细长略弯曲，且有分枝现象。在镜下可见大量麻风细胞。下可见大量麻风细胞。2.活组织切片活组织切片 抗酸染色及病理学检查。抗酸染色及病理学检查。二、微生物学检验二、微生物学检验（四）其他诊断方法（四）其他诊断方法 该菌目前尚不能人工培养该菌目前尚不能人工培养近年采用近年采用PCR技术检测麻风菌基因、运用技术检测麻风菌基因、运用新发现抗原血清学与新发现抗原血清学与T细胞试验可以对麻风细胞试验可以对麻风病进行早期诊断。病进行早期诊断。第四节第四节 放线菌属放线菌属放线菌（放线菌（Actinomyces）能引起牛和人的疾病）能引起牛和人的疾病1891年，年，Wolff和和Israel应用厌氧培养法，首先应用厌氧培养法，首先将人型放线菌培养成功。将人型放线菌培养成功。因菌落生长呈放射状而得名。因菌落生长呈放射状而得名。一、分一、分 类类放线菌是引起人放线菌病（放线菌是引起人放线菌病（Actinomycosis）的）的病原菌，属于内源性感染。病原菌，属于内源性感染。目前发现衣氏放线菌（目前发现衣氏放线菌（A.israelii）、内氏放线菌）、内氏放线菌（A.naeslundii）粘放线菌）粘放线菌(A.viscous)、龋齿放、龋齿放线菌（线菌（A.odontolyticus）及丙酸蛛网菌。）及丙酸蛛网菌。（Arachniapropionica）5种可引起人的放线菌种可引起人的放线菌病，其中衣氏放线菌最多见。病，其中衣氏放线菌最多见。牛型放线菌（牛型放线菌（A.bovis）是本属的典型菌种，主要）是本属的典型菌种，主要引起牛的放线菌病。引起牛的放线菌病。放线菌目（放线菌目（ActinomycetalesActinomycetales）放线菌属（放线菌属（ActinomycesActinomyces）诺卡菌属（诺卡菌属（NocardiaNocardia）分枝杆菌属（分枝杆菌属（MycobacteriumMycobacterium）分类分类（1 1）含分枝菌酸含分枝菌酸 诺卡菌属诺卡菌属 分枝杆菌属分枝杆菌属 棒状杆菌属棒状杆菌属 （2 2）不含分枝菌酸）不含分枝菌酸 放线菌属放线菌属二、临床意义二、临床意义放线菌：正常菌群放线菌：正常菌群所致疾病：所致疾病：1.1.内内源源性性感感染染(放放线线菌菌病病)：软软组组织织肉肉芽芽肿肿性性炎炎症症(慢慢性性,无无痛痛,多多发发性性瘘瘘管管,排排出出硫硫磺磺样颗粒。样颗粒。)2.2.龋齿和牙周炎龋齿和牙周炎（一）基本特性（一）基本特性G+、非抗酸性丝状菌、非抗酸性丝状菌培养困难，厌氧或微需氧培养困难，厌氧或微需氧硫磺样颗粒（菌落）硫磺样颗粒（菌落）压片或组织切片，显微镜下可见颗粒呈菊花状。压片或组织切片，显微镜下可见颗粒呈菊花状。三、微生物学检验三、微生物学检验硫磺样颗粒硫磺样颗粒(sulfur granule)(sulfur granule)（二）分离培养（二）分离培养培养：厌氧或微需氧培养：厌氧或微需氧气体环境：气体环境：5 5 COCO2 2营养培养基：脑心浸液琼脂平板营养培养基：脑心浸液琼脂平板温度与时间：温度与时间：3737，242448h48h菌落菌落:灰白色蜘蛛状、不规则结节状或臼齿状菌落灰白色蜘蛛状、不规则结节状或臼齿状菌落,初分离初分离(粗糙粗糙)生化特性生化特性:溶血溶血(-)(-)葡萄糖葡萄糖(+)(+)甘露醇甘露醇(+)(+)吲哚吲哚(-)(-)触酶试验触酶试验(-)(-)【黏液放线菌除外黏液放线菌除外】三、微生物学检验三、微生物学检验放线菌菌落特点放线菌菌落特点第五节第五节 诺卡菌属诺卡菌属1.1.需氧菌需氧菌2.2.含分枝菌酸含分枝菌酸3.3.分布分布 土壤中，多数不致病菌土壤中，多数不致病菌4.4.致病菌致病菌 星形诺卡菌（星形诺卡菌（N.asteroidesN.asteroides）巴西诺卡菌（巴西诺卡菌（N.brasiliensisN.brasiliensis）一、概一、概 述述诺卡菌属（诺卡菌属（Nocardia）革兰染色不定，一革兰染色不定，一般认为该菌为革兰阳性杆菌般认为该菌为革兰阳性杆菌有细长的分枝菌丝，生长于表面并伸入琼有细长的分枝菌丝，生长于表面并伸入琼脂培养基中脂培养基中生长的某个时期有弱抗酸性生长的某个时期有弱抗酸性形态与放线菌相似，但菌丝末端不膨大形态与放线菌相似，但菌丝末端不膨大二、分二、分 类类该属包括至少包括该属包括至少包括22个菌种个菌种医学上常见的有医学上常见的有13个种：脓肿诺卡菌、非个种：脓肿诺卡菌、非洲诺卡菌、星形卡菌、巴西诺卡菌、短链洲诺卡菌、星形卡菌、巴西诺卡菌、短