最新实验2植物细胞切片的制作PPT课件.ppt

实验实验2 2植物细胞切片的制作植物细胞切片的制作二、二、实验实验用品和材料用品和材料1、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘液液。2、蚕豆（芹菜）茎和叶蚕豆（芹菜）茎和叶3、洋葱或玉米根尖纵切永久制片洋葱或玉米根尖纵切永久制片4、南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片.5、洋葱鳞叶、马铃薯块茎。洋葱鳞叶、马铃薯块茎。石石蜡蜡切切片片机机（二）永久装片的制作（二）永久装片的制作1、材料预处理材料预处理 将材料装在将材料装在25ml规格的小指管，规格的小指管，加入甘油加入甘油酒精软化剂（甘油酒精软化剂（甘油1份，份，70%酒精酒精1份）份）8ml封盖后在电热恒封盖后在电热恒温水浴锅温水浴锅5018h，第二天升温至，第二天升温至608h进行软化。进行软化。2、蜡块制取蜡块制取1）逐级脱水）逐级脱水 将上述经软化的材料转入将上述经软化的材料转入250ml已洗净的输液瓶中加入已洗净的输液瓶中加入40ml，70%酒酒精脱水精脱水24h。分别加入各级酒精。分别加入各级酒精40ml，70%酒精脱水酒精脱水24h，85%酒精脱水酒精脱水12h，95%酒酒精脱水精脱水2h，无水酒精脱水，无水酒精脱水1h。同时回收各。同时回收各级酒精。级酒精。2）染色）染色 番红酒精染液染色（番红酒精染液染色（1g番红溶于番红溶于100ml 50%酒精中，纱布过滤）染色酒精中，纱布过滤）染色24h。3）透明）透明 转入转入1/2二甲苯二甲苯1/2无水酒精混合无水酒精混合液液20ml透明透明1h，纯二甲苯，纯二甲苯20 ml透明透明1h,再用纯再用纯二甲苯二甲苯20ml透明透明40min，并回收各液。，并回收各液。4）浸蜡）浸蜡 将透明过的材料转入将透明过的材料转入50ml小烧杯小烧杯,在恒温箱内加入预先在温度保持在在恒温箱内加入预先在温度保持在5658恒恒温箱溶化并过滤的石蜡温箱溶化并过滤的石蜡15ml，使材料完全被纯，使材料完全被纯二甲苯与石蜡浸没，并使温度保持在二甲苯与石蜡浸没，并使温度保持在3638,过夜浸蜡过夜浸蜡24h，待二甲苯完全挥发，回收，待二甲苯完全挥发，回收石蜡石蜡,再加入溶化并过滤的纯石蜡再加入溶化并过滤的纯石蜡40ml，温度，温度保持在保持在36381h，升温至，升温至56，使石蜡保持，使石蜡保持溶化状态。溶化状态。5）包埋：）包埋：将浸蜡完全的材料倒入预先制将浸蜡完全的材料倒入预先制成的光滑的硬纸（成的光滑的硬纸（10.01.01.0）制成的）制成的纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处摆纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处摆好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒温好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒温箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱底箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱底面金属板，倒入溶化石蜡面金属板，倒入溶化石蜡0.20.3厚的薄厚的薄层，层，2min后待薄层稍有凝固时将材料依次后待薄层稍有凝固时将材料依次排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧热排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧热的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两端的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中冷预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中冷却制成石蜡块。却制成石蜡块。6）石蜡块的修整：）石蜡块的修整：剥去纸盒，用锐利的剥去纸盒，用锐利的单面刀片把石蜡块切分为单面刀片把石蜡块切分为2长的小蜡块，并将长的小蜡块，并将各小蜡块的各面修整平，再将其修成长楔形。各小蜡块的各面修整平，再将其修成长楔形。3、切片、切片1）固定石蜡块）固定石蜡块：用在酒精灯上预热用在酒精灯上预热好好的解的解剖刀剖刀，融，融化修整好的石蜡块中少许蜡后化修整好的石蜡块中少许蜡后，立即粘立即粘牢在小木块牢在小木块（2.5 21.5cm）上，待蜡完全凝固）上，待蜡完全凝固结实后结实后，将小木块夹入切片机的固定夹板中固定将小木块夹入切片机的固定夹板中固定；2）切片切片：调整切片机调整切片机的的切片厚度为切片厚度为814 m,切取石蜡块薄片切取石蜡块薄片。4、粘贴展平粘贴展平选取洁净的载玻片选取洁净的载玻片，于中央用火柴棒粘取明于中央用火柴棒粘取明胶粘贴剂（明胶胶粘贴剂（明胶2g电热恒水浴锅电热恒水浴锅60水浴溶于水浴溶于1000ml蒸馏水，纱布过滤）蒸馏水，纱布过滤），展成一薄层或滴加展成一薄层或滴加一滴蛋白甘油（取鸡蛋一个敲破流出蛋清，甘油一滴蛋白甘油（取鸡蛋一个敲破流出蛋清，甘油即丙三醇，此粘贴剂较明胶粘贴剂理想）即丙三醇，此粘贴剂较明胶粘贴剂理想），用细用细玻棒展成一薄层，加蒸馏水一滴，挑取理想的蜡玻棒展成一薄层，加蒸馏水一滴，挑取理想的蜡带贴于粘贴剂上，在酒精灯火焰稍过带贴于粘贴剂上，在酒精灯火焰稍过34来回来回，或恒温或恒温37展片台展片台6min，使蜡展在粘贴剂上并展，使蜡展在粘贴剂上并展平。将展平的材料连同一侧贴有标签的载玻片平。将展平的材料连同一侧贴有标签的载玻片，置于置于37电热恒温箱电热恒温箱24h，使水分蒸干使水分蒸干，或恒温或恒温37展片台展片台12h，或室内自然晾干。或室内自然晾干。5、染色制片染色制片1）脱蜡：）脱蜡：将粘有蜡片的载玻片排列在装片将粘有蜡片的载玻片排列在装片架上，转入盛有架上，转入盛有400ml纯二甲苯的纯二甲苯的1000ml大烧杯中大烧杯中20min，杯口用塑料袋封严，再，杯口用塑料袋封严，再转入盛有转入盛有400ml纯二甲苯的纯二甲苯的1000ml大烧杯大烧杯中中10min，杯口同样用塑料袋封严，使石，杯口同样用塑料袋封严，使石蜡完全溶解。蜡完全溶解。2）过渡：）过渡：将脱蜡完全的装片架转入盛有将脱蜡完全的装片架转入盛有400ml1/2二甲苯二甲苯1/2纯酒精混合液的纯酒精混合液的1000ml大烧杯中过渡大烧杯中过渡5min，杯口仍用塑，杯口仍用塑料袋封严。料袋封严。3）下降至）下降至70%酒精（水）：酒精（水）：分别经分别经400 ml纯酒精、纯酒精、95%、85%、70%酒精割酒精割400 ml（50%及及30%酒精下降至蒸馏水）酒精下降至蒸馏水），并回收各液。，并回收各液。4）番红复染色：）番红复染色：400 ml 1%番红酒精（水番红酒精（水液）再染色液）再染色2h。回收染液，。回收染液，并用自来水并用自来水洗去多余的染液。洗去多余的染液。5）继续脱水：）继续脱水：用用30%、50%和和70%酒精酒精400 ml各处理各处理30s1 min，并回收各液。，并回收各液。6）固绿复染：）固绿复染：用用0.1%固绿的固绿的95%酒精酒精400 ml复染复染1030s，回收染液。，回收染液。7）再继续脱水：）再继续脱水：用用95%酒精和两次纯酒精酒精和两次纯酒精彻底脱水，每次彻底脱水，每次10 s1 min，回收各液。，回收各液。8）透明：）透明：用纯酒精和二甲苯各半的混合液用纯酒精和二甲苯各半的混合液400 ml处理处理5 min，再用，再用400 ml纯二甲苯纯二甲苯浸浸5 min，使材料完全透明，并回收各液。，使材料完全透明，并回收各液。9）封片：）封片：将载玻片自二甲苯中取出，立即将载玻片自二甲苯中取出，立即滴一滴用二甲苯溶解的加拿大树胶于材滴一滴用二甲苯溶解的加拿大树胶于材料之上，加盖盖玻片。置玻片标本于烘料之上，加盖盖玻片。置玻片标本于烘箱中烘干即可。箱中烘干即可。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！19