DB4114_T 214-2023 马铃薯容器薯生产技术规程.docx

ICS 65.020.20CCS B 054114商丘市地方标准DB 4114/T 2142023马铃薯容器薯生产技术规程2023 - 10 - 12 发布2023 - 11 - 12 实施商丘市市场监督管理局发 布DB 4114/T 2142023目次前言 . II1 范围 . 12 规范性引用文件 . 13 术语和定义 . 14 容器薯生产设施设备 . 15 容器薯生产技术 . 26 容器薯生产 . 2附录 A（资料性）容器薯生产设备清单 . 4附录 B（资料性）常用试剂及植物生长物质的配制 . 5附录 C（资料性）MS 培养基母液成分及配制 . 6IDB 4114/T 2142023前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由商丘市农业农村局提出并归口。本文件起草单位：河南德道农业科技有限公司、商丘师范学院、商丘职业技术学院、商丘市睢阳区农业农村局、商丘市睢阳区经济作物技术推广中心、宁陵县农业农村局、商丘市梁园区农业机械发展中心、商丘市乡村产业发展中心本文件主要起草人：陈亚伟、马丽、纪耀坤、李淑敏、轩青霞、路楠、苏寒、刘为慧、何涛、刘靖、李知翰、张驰II面积20 m 40 m 可调温,调湿,调光,消毒灭菌处理,能进行脱毒苗有光培养和暗培养诱导的培养室.DB 4114/T 2142023马铃薯容器薯生产技术规程1范围本文件规定了马铃薯容器薯生产术语和定义、容器薯生产设施设备、容器薯生产技术、容器薯生产等。本文件适用于商丘市区域马铃薯容器薯生产2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 18133马铃薯种薯GB/T 29375马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程GB/T 29376马铃薯脱毒原原种繁育技术规程NY/T 401脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1脱毒苗应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗，经检测不带马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯A病毒（PVA）等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)，即为脱毒苗。3.2容器薯用脱毒苗组织培养的方法,在培养容器内通过诱导生产的微型小薯。4容器薯生产设施设备4.1组织培养室224.2容器直径不小于6.5 cm普通广口玻璃瓶.4.3生产设备1DB 4114/T 2142023容器薯所需主要设备参见附录表A4.4玻璃器皿及耗材包括盛装器皿（烧杯、试剂瓶等）、计量器皿（量筒、容量瓶等）以及其他常用消耗品等。主要有：试剂瓶、容量瓶、烧杯、玻璃棒、洗瓶、培养瓶及瓶盖、瓶刷、工作服、手套等。5容器薯生产技术5.1母液的配制与保存配制基本培养基母液，MS基本培养基母液配制比例参见附录C。配制应使用去离子水，配好的母液置于4 保存，母液保存期应不超过30 d。母液容器上应贴好标签，注明名称、配制日期。5.2培养基制作扩繁培养基：MS+蔗糖30 g/L+琼脂7 g，pH 5.8，固体培养基。1 L固体培养基加蒸馏水700 mL（按所需容量的70%左右），再加入琼脂 7 g，加热并不断搅拌使琼脂完全融化。加入蔗糖 30 g，待完全溶解后，按附录A加入母液，再根据要求加入适量植物生长调节物质并充分搅拌，最后定容至1 L。用0.1mol/L的HCL或0.1 mol/L的NaOH调节pH值至5.8。制作液体培养基的过程与固态培养基基本相同，但不需要加琼脂，加热时间可以适当缩短。壮苗培养基：MS+蔗糖30 g/L，pH 5.8，液体培养基。试管薯诱导培养基：MS+500 mg/L CCC+80 g/L白糖+0.1%活性炭，pH 5.8，液体培养基。常用试剂及植物生长物质的配制见附录B。5.3培养基灭菌制作好的培养基分装到培养瓶中后，装入高压灭菌锅，在0.1 Mpa 压力下温度115 灭菌22 min，取出后水平摆放，冷却备用。6容器薯生产6.1诱导材料选取马铃薯种薯符合GB 18133规定。选择具备该品种典型性状的株系，挑选植株健壮、长势良好、茎秆粗壮、根系发达的脱毒苗作为诱导材料。6.2脱毒苗繁育6.2.1脱毒苗转接马铃薯脱毒苗繁育符合GB/T 29375规定。将健壮基础苗剪去顶芽和基部茎节，留中间带4 个6 个节的茎段，转入壮苗培养基用浅层静止方式培养。3 周4 周后每个茎段发育成一株带有5 个7 个节的健壮苗。6.2.2培养条件培养室温度为白天23 25 、夜间16 20  ,光照时间16 h/d，光照强度2500 Lx4000 Lx以上。2DB 4114/T 21420236.2.3病毒检测病毒检测符合NY/T 401规定。6.3容器薯诱导在无菌条件下，将培养瓶中原来的培养基倒掉，再注入诱导结薯培养基。 在室温及光照16 h/d 条件下培养48 h以促进匍匐茎的形成，然后转入18 ±1 黑暗间散射光(8 h/d，光照强度500 Lx1000Lx)培养，3 d4 d后便可以产生容器薯，40 d45 d容器薯发育到直径5 mm以上可以收获。符合GB/T 29376规定。6.4收获及储存收获时将容器薯及茎段从培养瓶中取出，摘取符合收获标准的小薯，用清水多次冲洗， 直至洗净表面附着的培养基，于阴凉处阴干或烘干，再贮藏于透气的容器中，置于4 条件下保存。容器薯经国家法定植检部门检验合格后，方可作为商品容器种薯。3设备名称型      号单 位数 量耐高温组培筐52.5 cm×42.5 cm×7 cm个500钢质洗瓶槽XSC-3套4半自动洗瓶机NH-CX-12台1超纯水机SH-H-CSJ120台1培养基加热炉NH-H28台1培养基自助灌装机2D70SJ台1超净工作台NH-CJ-2S台4接种器具杀菌器NH-330/nH350台5高效节能培养架NH-PYJ-10A套100臭氧发生器120台2生物显微镜XSP-8C台1电子天平（1/10000g）FA1104A台1电子天平（1/1000g）JA2103N台1电子秤ACS-3台1酸度计PHS-3C台1高压灭菌锅DSX-280B台1低温低湿柜CZ-250FC台1智能光照培养箱GTOP-310B台1空调新风系统KFR-35GW/BP3DNIY台2冰箱BCD-88CM88L台1DB 4114/T 2142023A               A附录A（资料性）容器薯生产设备清单容器薯生产设备清单见表A.1。表A.1  容器薯生产设备清单4DB 4114/T 2142023B               B附录B（资料性）常用试剂及植物生长物质的配制B.10.1 mol/L HCl的配制：根据盐酸的密度 37%盐酸溶液的密度为1.19 g/mL ，假设要配制1000mL1 mol/L HCl，则需要盐酸的物质的量为1 mol，所以需要量取37%的盐酸为0.1*36.5/37%/1.19=8.2mLB.20.1 mol/L NaOH 的配制：称0.4 gNaOH ，溶于100 mL蒸馏水中。B.395%的酒精配制成75%的酒精：用量筒量取750 mL的95%酒精加入200 mL的蒸馏水，即可得到75%的酒精。5母液种类成分称取用量（g）母液定容体 积（mL）配制1升MS培养基吸 取量（mL）大量元素（A）CaCl2 (无水)3.321000100KNO319.0KH2PO41.7NH4NO316.5MgSO4·7H2O3.7微量元素（B）H3BO30.620100010MnSO4·H2O2.230ZnSO4·7H2O0.860KI0.083Na2 MoO4·2H2O0.025CuSO40.0016CoCl2·6H2O0.0025铁盐（C）EDTA-Na23.73100010FeSO4·7H2O2.78维生素（D）肌醇5.00050010甘氨酸0.100烟酸0.025盐酸吡哆辛(B6)0.025盐酸硫胺素(B1)0.020注：1. A 母液中 CaCl2 ，KH2 PO4 ，KNO3 ，NH4NO3 分别溶解混合加水至 800 mL左右，再称取 MgSO4·7H2O 溶解后 与之合并，定容至 1000 mL。2.    C 母液中 EDTA-Na2 与 FeSO4·7H2O 应分别用热水溶解后混合并加热使其充分螯和。DB 4114/T 2142023C               C附录C（资料性）MS 培养基母液成分及配制MS培养基母液成分及配制见表C.1。表C.1  MS 培养基母液成分及配制6