高效液相色谱仪原理及应用实验指导书.doc
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1、高效液相色谱仪原理及应用实验指导书高效液相色谱仪原理及应用实验指导书贵州大学精细化工研究开发中心(绿色农药与生物工程重点实验室)1. 实验类型:实验类型:设计型实验(研究性实验)2.课时安排课时安排:6 课时3.实验目的和意义实验目的和意义:通过学习高效液相色谱仪的构成和使用方法,及其在定性、定量分析中的应用,培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯(准备充分、操作规范,记录简明,台面整洁、实验有序,良好的环保和公德意识) 。培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归
2、纳总结的能力等。4. 实验原理实验原理高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同,当试样随着流动相进入色谱柱中后,组分就在其中的两相间进行反复多次(103-106)的分配(吸附脱附放出)由于固定相对各种组分的吸附能力不同(即保存作用不同) ,因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同,经过一定的柱长后,便彼此分离,顺序离开色谱柱进入检测器,产生的离子流信号经放大后,在记录器上描绘出各组分的色谱峰。5. 实验设备实验设备高效液相色谱仪、色谱柱、容量瓶、分析实验室常用玻璃仪器、甲醇等色谱纯试剂,超纯水,滤膜。农药标准品。6. 实验内容:实验内容:了解并初步掌握高效液相色
3、谱仪的基本原理与构造;了解高效液相色谱仪常用的几种检测器工作原理和使用范围;学习高效液相色谱法分离化合物和检测化合物的含量的方法;通过测定对样品的定性、定量测定,初步掌握获得高效液相色谱谱图和数据的一般操作程序与技术;学习样品制备的方法;了解影响分析测定的重要因素,学会优化分析条件;学习谱图和数据的处理方法。1) 样品制备 样品制备过程中,要同时考虑将被分析的样品中,可能干扰欲测组分定量的物质尽可能的分离出去。当欲测组分含量很低时,还要考虑通过样品制备使欲测组分在试验样品中的含量得以提高,便于进行色谱分析。2) 定性、定量方法保留时间定性;峰高、峰面积定量(归一法、外标法、内标法、标准加入法)
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