实验一、戊巴比妥钠的ED50测定.ppt
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1、中国协和医科大学八年制临床医学生药理学实验,实验四 放射配体-受体结合实验,中国协和医科大学药理学系 叶菜英,实验目的,观察了解受体与配基的结合方式、原理。,掌握受体与配基结合饱和曲线、解离常数及受体含量的测定与计算方法。,实验原理1,本实验用氚标记的依托啡(Etorphine)研究阿片受体及其配基的结合情况,计算出受体含量及解离常数,分析有多种不同亲和力的受体存在时配基与受体相互作用规律。,实验原理2,放射配基与受体制备物作用时,有配基与受体的特异性结合和配基与非受体分子的非特异性结合。特异性结合亲和力高且有饱和性,非特异性结合不易饱和。为得出特异性结合量,必须设法在总结合量中减去非特异结合
2、量。,实验原理3,总结合管中包含有特异结合与非特异结合量,同时制备的非特异结合管中需加入大量(远远大于标记的放射性配基)非标记特异性配基以使受体几乎全部被非标记配基饱和,标记配基只能与非特异性位点结合,从而得到总结合量和非标记结合量。,实验原理4,由此我们可以得到总结合量和非特异性结合量的计数,然后用总结合管计数减掉非特异结合管的计数即可得到特异性结合量,根据clark受体理论,作Scatchard图,即可求出最大结合量Bmax及解离常数 KD。,材料方法,*材料: 1、3H-依托啡,25M水溶液,按1:0.7的比例依次稀释,配制成6个浓度. 2、制备提取吗啡受体粗膜(P2膜) 3、甲苯闪烁液
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