电针疗法对大鼠胃肠激素的影响.docx
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1、电针疗法对大鼠胃肠激素的影响摘要:目的观察电针对糖尿病胃轻瘫(DGP)模型大鼠胃肠激素的影响,讨论电针治疗DGP可能的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为5组:空白对照组,DGP模型组,电针穴位组,电针非穴组,胃复安对照组,每组12只。采用腹腔一次性注射2%链脲佐菌素(STZ)配合高糖高脂饲料不规则饮食制备DGP大鼠模型,连续8周;用OneTouch血糖仪测血糖,尿糖试纸测尿糖,实验结束后观测大鼠胃排空率、肠移行率,ELISA法检测大鼠血清生长激素(GH)水安然平静胃窦组织促生长素(Ghrelin)含量。结果与空白对照组比拟,DGP模型组大鼠血糖及尿糖值均明显升高(P001),胃排空率、肠移
2、行率、血清GH水平及胃窦Ghrelin含量均明显下降(P001或P005);与DGP模型组比拟,电针穴位组大鼠血糖及尿糖值均明显降低(P005),胃排空率、肠移行率、血清GH水平及胃窦Ghrelin含量均明显升高(P001或P005)。结论电针能调节血糖水平,促进胃肠排空,改善DGP症状,其作用机制可能与电针上调血清GH水安然平静胃窦组织Ghrelin含量有关。关键词:糖尿病胃轻瘫;电针疗法;促生长素;生长激素;胃排空;大鼠糖尿病胃轻瘫(DiabeticGastroparesis,DGP)是以胃排空延迟,胃动力低下为主要特点的临床症候群,主要表现为厌食、嗳气、早饱、食欲不振、恶心干呕、体重减轻
3、等症状,是糖尿病的主要慢性并发症之一。其病因复杂多变,大多数研究以为其发病机制可能与高血糖、自主神经病变、胃肠激素失衡及胃肠道平滑肌超微构造的改变等因素有关1。胃肠激素的介入则被以为在此类疾病发生发展中发挥了重要作用。研究发现,目前临床治疗DGP常用促胃动力药来缓解症状,但疗效不佳,且长期使用易产生耐药性。而采用针灸治疗DGP有一定的疗效和优势,能治愈或改善胃轻瘫的症状,同时又能兼顾降血糖,起到双重的治疗作用25。但有关针灸治疗DGP的文献报道大多数只停留在临床研究,基础研究太少,且缺乏作用机制的研究。本实验通过建立DGP大鼠模型,采用ELISA法检测血清生长激素(GH)水安然平静胃窦组织促生
4、长素(Ghrelin)含量,以讨论电针防治DGP的作用机制。1材料11动物健康成年SD大鼠,SPF级,雌雄各半,体重(23110)g,共60只,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,动物质量合格证号:43004700002152。饲养温度25,相对湿度50%70%,自由摄食、饮水。12主要试剂链脲佐菌素(STZ):美国Sigama公司生产,临用前用01mmol/L(pH42,4)柠檬酸柠檬酸钠缓冲液配成2%浓度的溶液;高糖高脂饲料:由普通饲料按比例(普通饲料、熟猪油、蔗糖、奶粉、鸡蛋之比为58152052)加工而成;血糖试纸:美国强生公司生产;尿糖试纸:广州花都高尔宝生物技术有限公司生产;胃复安
5、:山西云鹏制药生产;酚红:天津恒兴化学试剂制造有限公司生产;柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠:湖南汇虹试剂公司生产;三氯乙酸:天津科密欧化学试剂有限公司生产;大鼠GH、Ghrelin酶联免疫试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。13主要仪器血糖仪:美国强生公司生产;电子天平:日本岛津AEL-120型;电针仪:华佗牌SDZ-型;针灸针:苏州华伦医疗用品有限公司生产;紫外分光光度计:日本岛津UV-1800型;酶标仪:上海热电MultiskanMK3。2方法21糖尿病胃轻瘫模型制作根据参考文献6,将大鼠购回先适应性喂养7d,均经血糖试纸检测、尿糖试纸检测,血糖正常、尿糖阴性者入选。禁食12h,空白对照组大鼠
6、于左下腹腔内单次注射等容量的01mmol/L(pH42,4)柠檬酸柠檬酸钠缓冲液,剩余大鼠按55mg/kg的剂量于左下腹腔内单次注射2%STZ溶液,72h后取尾静脉血用OneTouch血糖仪和血糖试纸测血糖,即刻血糖167mmol/L者作为糖尿病大鼠。空白对照组大鼠给予普通饲料规则喂养,剩余大鼠给予高糖高脂饲料不规则喂养(即采取单日上午和双日下午进食法),每周测定血糖及尿糖1次,同时观察大鼠的体重、饮食、饮水、毛色、大小便、活动及精神状况等,持续8周,期间检测血糖167mmol/L者予以剔除实验。DGP造模成功指标:监测大鼠血糖、尿糖,血糖167mmol/L、尿糖阳性者;大鼠一般情况及大便性状
7、与正常对照组有明显差异者;大鼠胃排空率及肠移行率与正常对照组相比有显著差异者。模型制作方法详见参考文献7。22穴位及非穴对照点定位穴位定位参照李忠仁主编的(实验针灸学)常用动物穴位定位法及拟人对照法定位。“足三里:膝关节后外侧,腓骨小头下约5mm处;“三阴交:后肢内踝尖直上10mm处;“梁门:以胸骨柄上缘和耻骨联合连线下1/4与上3/4交点为肚脐,胸剑联合到肚脐连线中点的水平线与锁骨中线相交处;“足三里对照点:在平“足三里穴外侧5mm处;“三阴交对照点:在平“三阴交穴后侧5mm处;“梁门对照点:在平“梁门穴外侧5mm处。23电针方法将大鼠束缚于鼠板上,取大鼠单侧“足三里“三阴交“梁门穴或这些穴
8、位的对照点(非穴点),定位后局部剪毛,穴位针刺由专人操作,均采用025mm25mm毫针直刺57mm,针刺后,用电针仪的一组输出线的负极接在穴位或非穴位对照点上,正极接在该穴位或非穴对照点下2mm的附点上,每只大鼠共接3组输出线,用疏密波(疏波为10Hz,密波为50Hz;疏波时间为10s,密波时间为15s),强度以毫针或穴位周围肌肉出现稍微颤抖为度,留针20min,隔日左右交替治疗,每日1次,连续治疗15d。24分组治疗将60只SD大鼠完全随机分成5组:空白对照组,DGP模型组,电针穴位组(模型+电针穴位组),电针非穴位组(模型+电针穴位对照点组),胃复安对照组(模型+胃复安灌胃组),每组12只
9、。空白对照组、DGP模型组大鼠每日仅捆绑不针刺20min,电针穴位组每日捆绑后电针穴位20min,电针非穴组每日捆绑后电针穴位对照点20min,胃复安对照组每日予以17%胃复安药液(017mg/kg)灌胃治疗,每日1次,连续处理15d,实验期间大鼠均自由摄食和饮水。实验结束后,大鼠禁食24h,禁水2h,于第16天给予5g/L酚红溶液2mL灌胃,20min后以10%水合氯醛按3mL/kg剂量腹腔注射麻醉后取材。25标本采集血清处理:大鼠麻醉固定后,予腹主动脉采血,常温放置23h,43000r/min离心15min,取上清液,EP管分装,20保存,待测GH水平。胃肠处理:大鼠剖腹,结扎贲门及幽门取
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