华南师范大学实验报告.doc
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1、- 1 -华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名学生姓名 林 鸿 锦 学学 号号 20070004002 专专 业业 综合理科二班 年级、班级年级、班级 07 级 课程名称课程名称 生物化学实验 实验项目实验项目 维生素 C 的定量测定 实验类型实验类型 验证验证 设计设计 综合综合 试验时间试验时间 2008 年年 11 月月 3 日日实验指导老师实验指导老师 陈 文 利 实验评分实验评分 一、目的掌握 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素 C 的原理和方法。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一,缺少它时会产生坏血病,因此又称为抗坏血酸(ascorbic acid) 。它
2、对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来,发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力,并具有化学致癌物的阻断作用。维生素 C 是具有 L 系糖构型的不饱和多羟基物,属于水溶性维生素。它分布很广,植物的绿色部分及许多水果、蔬菜中的含量更为丰富。- 2 -维生素 C 具有很强的还原性。还原型抗坏血酸能还原染料 2,6-二氯酚靛酚(DCIP) ,本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色。因此,当用此染料滴定含有维生素 C 的酸性溶液时,维生素 C 尚未全部被氧化前,则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素 C 已全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以,当溶
3、液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚刚全部被氧化,此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰,样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。三、材料、试剂与器具(一)(一) 材料材料新鲜花椰菜(二)(二) 试剂试剂(实验室已备)1、 标准抗坏血酸溶液(0.1mg/mL)2、 2%草酸溶液3、 1%草酸溶液4、 0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液(三)(三) 器具器具1、 锥形瓶(50-100mL)2、 移液管(1mL,10mL)3、 容量瓶(100mL)4、 微量滴定管(3mL)5、 漏斗四、实验过程(一)(一) 提取提取水洗净新鲜的花椰菜,称取 1.5g1.5g 剪碎,
4、置研钵中加 5mL2%草酸,研磨成浆,倒入100mL 的容量瓶中,用 2%草酸洗涤研 3 次,洗液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度,充分混匀后过滤(弃去最初几个 mL 滤液) 。(二)(二) 滴定滴定1、 标定 2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度取标准维生素 C 溶液 1mL,和 9mL1%草酸一齐加入 50mL 锥形瓶中,同时量取 10mL 草酸加入另一个 50mL 锥形瓶中作空白对照。用 0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液分别滴定至粉红色- 3 -出现,15s 不退色。记录见下表。溶液始末刻度(始-末) (mL)用去染料体积(mL)维 C+草酸0.29-2.63,0.31-1.01(中途补充)3.
5、04草酸0.09-0.270.18根据所用 mL 数,计算每 mL2,6-二氯酚靛酚所能氧化维生素 C 的 mg 数(K K):0.1/(3.04-0.18)=0.0352、 样品的测定取 50mL 锥形瓶 2 个,分别加入滤液 10mL,用已标定的 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点,以粉红色能保持 15s 不退色为止。同时用 10mL2%草酸作空白对照。记录见下表。溶液始末刻度(始-末) (mL)用去染料体积(mL)平均值(mL)第一次0.00-2.762.76 样品 第二次0.00-2.762.76V V1 1=2.76草酸0.98-1.09V V2 2=0.11-(三)(三) 结果计算结
6、果计算根据实验数据计算出每 100g 样品的维生素 C 含量:维生素 C(mg/100g 样品)=(V1-V2)KV100/(WV3)式中:V1为滴定样品所用去的染料体积(mL) ;V2为滴定空白所用去的染料体积(mL) ;V3为样品测定时所用滤液体积(10mL) ;V 为样品提取液的总体积(100mL) ;K 为 1mL 染料氧化维生素 C 的量(mg) ;W 为称取样品重量(g) 。将数据代入上式:(2.76-0.11)0.035100100/(1.510)=61.8(mg/100g 样品)五、实验讨论(一)(一) 注意事项注意事项1、某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物泡沫太多,可加
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