叶绿素检测作业指导书.doc
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1、叶绿素检测作业指导书叶绿素检测作业指导书1.1.试剂试剂1.1 碳酸镁悬浮液:称取 1.0g 细粉末碳酸镁悬浮于100ml 蒸馏水中。每次使用时,要充分摇匀。1.2 丙酮溶液:在 900ml 丙酮中加 100ml 蒸馏水。1.3 盐酸溶液:量取 83ml 盐酸溶于水中,冷却并稀释至 1000ml。2.2.测定步骤测定步骤2.1 浓缩:在一定量的试样中添加 0.2ml 碳酸镁悬浮液,充分搅匀后,用直径 60mm 的微孔滤膜吸滤。过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟。如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。2.2 提取:将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中,加入3ml 丙酮溶液至
2、滤纸浸湿的程度, 把滤膜研碎,再少量地加 90%的丙酮溶液,把滤膜完全研碎,然后用 90%丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中,使离心管内提取液的总体积不超过 6ml,盖上管塞,置于 4的暗处浸泡 24h。2.3 离心:将离心管放入离心机中,以 4000r/min 速度离心分离 20min。将上清液移入标定过的 10ml 具塞刻度管中,加少量 90%丙酮溶液于原提取液的离心管中,再次悬浮沉淀物并离心,合并上清液。此操作重复 23 次,直至沉淀不含色素为止,最后将上清液定容至 10ml。2.4 测定:取上清液于 10mm 或 50mm 的比色池中,以90%丙酮溶液为对照溶液,
3、读取波长 750,663,645 和630nm 的吸光度。选择比色池的光程长度或稀释度,使其光密度 OD663 大于 0.2 小于 1.0。3.3.结果表示结果表示从各波长的吸光度中减去波长 750nm 的吸光度,作为已校正过的吸光度 D,按下式计算叶绿素的浓度:Ca=(11.64D663-2.16D645+0.10D630)V1/(V2L)Cb=(20.97D645-3.94D663-3.66D630)V1/(V2L)Cc=(54.22D630-14.8D645-5.53D663)V1/(V2L)式中:Ca叶绿素 a 的浓度;Cb叶绿素 b 的浓度;Cc叶绿素 c 的浓度;V1提取液的定容体积;V2过滤水样的体积;L比色池的光程长度;D已校正过的提取液吸光度。
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