赤潮毒素检测作业指导书.doc
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1、赤潮毒素检测作业指导书赤潮毒素检测作业指导书1.1.贝类样品的采集贝类样品的采集a)样品应采于赤潮发生区的水域或滩涂,选择人工养殖品种和野生经济食用种类;b)采样量应足以提供制取 100g 以上的组织匀浆量。此外,另采集 10 个个体,用 70%酒精溶液或 5%的甲醛溶液固定,以供分析胃内含物;c)依采集地点和品种,分别将样品置于冰柜中,投入注明采集地点、时间和品种的标签;d)采得的样品应尽快带回实验室及时处理,否则应放入冰箱保存。2.2.试样的制备试样的制备a)打开贝壳,将软组织和体液取出,用剪刀减碎,取100g 以上的量置于组织匀浆器中匀浆;b)称取 100.0g 匀浆样,置于 500ml
2、 烧杯中,加入100ml 盐酸溶液,充分搅拌。然后用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调 PH 为 34;c)将此烧杯置水浴中煮沸 5min,冷却至室温,再调节PH 为 24,后用盐酸溶液定容至 200ml;d)若组织样品不足 100g,可按 1g 组织得 2ml 的上述处理样进行制备;e)将处理的样品离心,离心速度 3000r/min,离心时间 5min。之后,小心倾取上清液,即是贝毒的抽提液,置冰箱备用。3.3.检测步骤检测步骤3.1 空白试验取 23 只小白鼠,在其腹腔处分别注入 1ml 盐酸溶液,若 1h 内无死亡,即可进行毒性试验。3.2 毒性试验:a)先进行预实验,以判断提取液毒性强弱。取 2
3、3 只小白鼠,在每只的腹腔内注射提取液 1ml,若小白鼠在4min 内死亡,可依死亡时间查出相应的鼠单位;b)按预实验得出的鼠单位数据,用盐酸溶液稀释提取液,使每毫升稀释液的毒性约含 1.60 个鼠单位,以便把小白鼠的致死时间基本控制在 48min 之间。若预实验时,小白鼠死亡时间大于 4min,提取液不必稀释;c)取 810 只小白鼠,于每只腹腔注射 1ml 抽取液,注意观察、记录每只死亡时间,死亡判定以最后一次喘息为准。死亡时间力求控制在 48min 之间。3.3 胃含物的分析与鉴定a)将野外固定的贝类样品外壳撬开,用吸管吸水冲洗其软体部分,剖开微囊,滴入少许清水,稍加搅动,吸出胃含物,按浮游植物计数法计数;b)认真鉴定胃含物种的藻种,确定胃内是否含有海区的赤潮生物,并计算其在饵料中的比例。4.4.记录与计算记录与计算将毒性试验检测记入表中。样品的毒素含量以 100g 组织含有的鼠单位 Mu 表示。1个鼠单位的定义是 15min 杀死一只 20g 重小白鼠的腹腔注射剂量。按式(19)计算 100g 贝类软组织中毒素含量:=200ABD.(19)式中:A每实验组小白鼠平均死亡时间查得的相应鼠单位;B每试验组小白鼠平均体重对应的鼠单位校正系数;D抽提液的稀释倍数。若死亡时间(T)为 240s480s,则 A 与 T 有如下的关系式:lgA=(145/T)-0.2.(20)
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