叶绿素a检测指导.doc
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1、叶绿素叶绿素 a 检测指导检测指导1 1.试剂及其配制试剂及其配制1.1 丙酮溶液(9+1):量取 900mL 丙酮(CH3COCH3)与 100mL 水混合,保存在棕色试剂瓶中。1.2 碳酸镁悬浮液(10g/L):称取 1g 碳酸镁(MgCO3) ,加水至 100mL,搅匀,盛试剂瓶中待用,用时需摇匀。1.3 硅胶2 2.测定步骤测定步骤2.1 样品制备量取 2L5L 海水样品,加入 3mL,碳酸镁悬浮液,混匀,用玻璃纤维滤膜(Wharman GF/C,0.47mm)或0.445um 的纤维素酯微孔滤膜过滤,过滤负压不应超过50kPa。2.2 样品的提取将过滤了的样品滤膜放入具塞离心管,加
2、10mL 丙酮溶液,摇荡,放置冰箱贮存室中 14h24h,提取叶绿素-a。若滤得样品不能及时提取,应将该滤膜抽干、对折,再套上一张滤纸,置于装有硅胶的干燥器内,贮存在低于1的冰箱中。2.3 样品离心离心速度:(30004000)r/min;离心时间:10min。3 3.样品测定样品测定小心将离心的上清液注入测定池。用丙酮溶液作参比,分别在 750nm、664nm、647nm、630nm 波长处测定吸光值。其中,750nm 处的测定,用以校正提取的浊度,当 1cm 测定池光程的吸光值超过 0.005 时,提取液应重新离心。4 4.记录与计算记录与计算将测得数据记入测定记录表中,分别把在波长664
3、nm、647nm、630nm 上测的吸光值减去 750nm 下的吸光值,得到校正后吸光值 E664、E647、E630.再按下式计算叶绿素 a、b、c 含量。Pchl-a=(11.85E664-1.54E647-0.08E630)v/VLPchl-b=(21.03E647-5.43E664-2.66E630)v/VLPchl-c=(24.52E630-1.67E664-7.60E647)v/VL式中:Pchl-a样品中叶绿素 a 含量,单位为微克每升(ug/L) ;Pchl-b样品中叶绿素 b 含量,单位为微克每升(ug/L) ;Pchl-c样品中叶绿素 c 含量,单位为微克每升(ug/L) ;v样品提取液体积,单位为毫升(mL);V海水样品实际用量,单位为升(L) ; L测定池光程,单位为厘米(cm) 。
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