食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法.docx
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1、附件 13食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法征求意见稿1.范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。 本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。第一法 比色法2.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的 特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条中检测线(T 线)上的抗原结合,从而导致检测线颜 色深浅的变化。通过检测线(T 线) 、控制线(C 线)的颜色深浅对比进行结果判读。3.试剂及材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,试验用水为 GB/T 6682 规定的二级水。3.1. 试剂3.1.1.乙腈。 3.1.2.甲
2、醇+水(7+3,体积比) 。 3.1.3.稀释缓冲液(胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置) 。3.2. 参考物质3.2.1.玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度95%。表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量玉米赤霉烯酮Zearalenone17924-92-4C18H22O5318.36注:或等同可溯源物质。3.3. 标准溶液的配制3.3.1.标准储备液:称取适量标准品,用乙腈(3.1.1)溶解,制成浓度为100 g/mL的标准储备液。18 避
3、光保存,有效期6个月。3.3.2.标准工作液:准确量取标准储备液(100 g/mL) (3.3.1)100 L,置于10 mL容量 瓶中,用乙腈(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1 g/mL的玉米赤霉烯酮标 准工作液,28 避光保存,有效期1个月。3.4. 材料玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒,适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。4.仪器和设备4.1. 移液器:100 L、200 L 、1 mL 和 5 mL。4.2. 旋涡混合器。4.3. 离心机。4.4. 电子天平:感量为 0.01 g。5.环境条件环境温度:2030 。 空气相对湿度:最佳测定湿度 45%65%。若湿度低于 45%
4、,相应延长待测液-试纸条反应时间,以质控实验为准;若湿度为 65%80%,微孔与试纸条拆开后立即使用,避免 微孔与试纸条长时间暴露在空气中受潮,避免高湿环境下(湿度 80%以上)进行实验。6.分析步骤6.1. 试样制备取适量样品,充分碾磨或粉碎混匀,过40目筛。6.2. 提取准确称取试样5.0 g(精确至0.01g)于50 mL离心管中,加入20 mL 甲醇+水溶液 (3.1.2) ,用旋涡混合器振荡3 min,离心分层或静置分层,上清液备用。 准确移取0.8 mL稀释缓冲液(3.1.3)于1.5 mL离心管中,加入25 L上清液,混匀,待 检。6.3. 测定步骤依检验所需,取相应数量的金标微
5、孔和试纸条,做好标记。吸取待检液 200 L 于金标 微孔中,抽吸至孔底的紫红色颗粒完全溶解,孵育 10 min。将试纸条插入金标微孔中,反 应 3 min5 min。 从金标微孔中取出试纸条,弃去试纸条下端的样品垫,观察显色结果,进行判定。 (若 试剂盒冷藏保存,使用前需恢复至实验操作环境温度。 )7.质控试验每批样品应该同时进行空白试验和阳性质控试验。7.1. 空白试验准确称取空白试样,按照 6.1 和 6.2 步骤与样品同法操作。7.2. 阳性质控试验准确称取玉米赤霉烯酮含量为60 g/kg的质控样,按照6.1和6.2步骤与样品同法操作。 或准确称取空白试样,加入一定体积的玉米赤霉烯酮标
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