液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法.doc
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1、1附件 7液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法(征求意见稿)1 范围本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合,抑 制抗体和试纸条或检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通 过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中三聚氰胺进行定性判定。3 试剂和材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇。3.1.2 三羟甲基氨基甲烷(Tr
2、is)。3.1.3 1mol/L盐酸:移取79.36mL浓盐酸,加水100mL水中,定容至1L。3.1.4 甲醇水溶液:准确量取50 mL甲醇和50 mL水,混匀后备用。3.1.5 稀释液:准确称取6.05 g Tris(3.1.2)和8.5 g 1 mol/L盐酸(3.1.3),加水定容至1 L,混 匀后备用。3.2 参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1,纯度 99%。表 1 三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量三聚氰胺Melamine108-78-1C3H6N6126.
3、12注:或等同可溯源物质。3.3 标准溶液的配制2三聚氰胺标准储备液(1 mg/mL):精密称取三聚氰胺标准品(3.2)适量,置于 10 mL 容量 瓶中,用甲醇水溶液(3.1.4)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为 1 mg/mL 的三聚氰胺标准 储备液;或可直接购三聚氰胺标准储备液。4避光保存备用,有效期 3 个月。3.4 材料三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒:适用基质为液体乳。3.4.1 金标微孔(含胶体金标记的特异性抗体)。 3.4.2 试纸条或检测卡。4 仪器和设备4.1 移液器:200 L、1000 L 和 5 mL。4.2 涡旋混合器。4.3 电子天平:感量为 0.01 g。4.4
4、环境条件:温度 1535,湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备取适量有代表性样品充分混匀。5.2 试样提取准确称取样品 0.5 g 于离心管中,加入 5 mL 稀释液(3.1.5) ,涡旋混匀提取 5 min,即得待 测液。5.3 测定步骤5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤吸取150200 L样品待测液于金标微孔(3.4.1)中,抽吸510次使混合均匀,不要有气泡,40温育3 min,将检测试纸条(3.4.2)样品端垂直向下插入金标微孔中,40温育5 min,从微 孔中取出试纸条,进行结果判定。5.3.2 检测卡测定步骤吸取150200 L样品待测液于检测卡加样孔(3.4.2)中,室温反
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