食品中大黄酚和橙黄决明素的测定 (BJS 201916).doc
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1、1附件 1食品中大黄酚和橙黄决明素的测定 BJS 2019161 1范围本方法规定了食品(含保健食品)中大黄酚和橙黄决明素的高效液相色谱测定方法。本方法适用于饮料、代用茶等食品及片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型的保健食品中大黄酚和橙黄决明素的含量测定。2 2原理试样经甲醇回流提取后,再以稀盐酸水解,二氯甲烷萃取,采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测,外标法定量。3 3试剂和材料除另有说明外,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。3.1.2 乙腈(C2H3N):色谱纯。3.1.3 磷酸(H3PO4
2、) 。3.1.4 二氯甲烷(CH2CL2) 。3.1.5 盐酸(HCL) 。3.1.6 无水乙醇(CH3CH2OH) 。23.1.7 乙酸乙酯(C4H8O2) 。3.1.8 甲酸(CH2O2) 。3.2 试剂配制3.2.1 磷酸水溶液(0.1%):取磷酸(3.1.3)1.0mL,加水定容至 1000mL。3.2.2 稀盐酸:取盐酸(3.1.5)234mL,用水溶解并定容至 1000mL。3.2.3 无水乙醇-乙酸乙酯(2+1)混合溶液:取无水乙醇 500mL 与乙酸乙酯 250mL,混匀。3.2.4 甲酸水溶液(0.1%):取甲酸(3.1.8)1.0mL,加水稀释并定容至 1000mL。3.3
3、 标准品橙黄决明素、大黄酚的标准品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见附录 A 表A.1。橙黄决明素的纯度98%,大黄酚的纯度99%。3.4 标准溶液配制3.4.1 标准储备液(100g/mL):分别称取大黄酚、橙黄决明素(3.3)各 0.0100g(精确至0.0001g) ,置 100mL 棕色量瓶中,用无水乙醇-乙酸乙酯(2+1)混合溶液(3.2.3)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为 100g/mL 的标准储备液,04冷藏保存,有效期 6 个月。3.4.2 混合标准中间液(20g/mL):分别准确吸取大黄酚、橙黄决明素标准储备液(100g/mL)(3.4.1)各 5mL,置同一 25m
4、L 棕色量瓶中,用无水乙醇-乙酸乙酯(2+1)混合溶液(3.2.3)稀释至刻度,摇匀。04冷藏保存,有效期 1 个月。3.4.3 混合标准工作液:分别准确吸取不同体积的混合标准中间液,用无水乙醇-乙酸乙酯(2+1)混合溶液(3.2.3)稀释成一系列标准工作液,该标准系列中大黄酚和橙黄决明素浓度为 0.2g/mL、0.5g/mL、2.0g/mL、4.0g/mL、10.0g/mL 、20.0g/mL。临用新制。4 4仪器和设备34.1 高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器。4.2 超声波清洗器。4.3 高速万能粉碎机。4.4 分析天平:感量分别为 0.01g 和 0.01mg。4.5
5、电热恒温水浴锅。4.6 旋转蒸发仪。4.7 氮吹仪。5 5分析步骤5.1 试样制备5.1.1 固态试样或半固态试样取适量固态试样(代用茶及片剂、胶囊内容物、颗粒剂等保健食品)混匀,研细,或取适量半固态试样(软胶囊内容物)混匀,称取 0.5g1g(精确至 0.001g),置平底烧瓶中,加入甲醇 50mL,混匀,称定重量,加热回流 1h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液 25mL 于平底烧瓶中,蒸干(或氮吹至干) ,加入稀盐酸(3.2.2)30mL,超声 2min,加热回流水解 1h,立即冷却,置于分液漏斗中,先用少量水洗涤烧瓶,再用少量二氯甲烷洗涤烧瓶,并入分液
6、漏斗中,酸液再用二氯甲烷振摇提取 4 次,用量依次为 40mL、30mL、30mL、20mL,合并二氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶液(3.2.3)溶解,转移至 25mL 容量瓶中,定容至刻度,溶液经 0.45m 有机系微孔滤膜滤过,取续滤液,根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内,备用。5.1.2 液态试样4取适量试样(饮料、口服液)混匀,准确吸取 2.05.0mL,置平底烧瓶中,水浴蒸干,加入稀盐酸(3.2.2)10mL,超声 2min,加热回流水解 1h,立即冷却,置于分液漏斗中,用少量水洗涤烧瓶,再用少量二氯甲烷洗涤烧瓶,并入分液漏斗中,酸液再用二
7、氯甲烷振摇提取 4 次,用量依次为 15mL、10mL、10mL、10mL,合并二氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶液(3.2.3)溶解,转移至 25mL 容量瓶中,定容至刻度,溶液经 0.45m 有机系微孔滤膜滤过,取续滤液,根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内,备用。5.2 色谱参考条件5.2.1 色谱柱:BDS HYPERSIL C18(4.6mm250mm, 5m)或性能相当者。5.2.2 流动相:A 相为甲醇,B 相为 0.1%磷酸水溶液(3.2.1),洗脱梯度程序见表 1。5.2.3 流速:1.0mL/min。5.2.4 柱温:30。5.2.5
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