艾滋病病毒灭活试验.docx
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1、艾滋病病毒灭活试验(1)目 的测定消毒剂对艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)灭活所需的剂量,以验证对该病毒污染物消毒实用剂量。(2)实验原理 用细胞感染法测定消毒剂作用前后(或实验组与对照组)样本中HIV 的量。以细胞病变作为判断指标,确定各组病毒的感染滴度,计算消毒剂对 HIV 的灭活对数值。(3)安全防护试验中要求采取严密防护措施。我国规定所有接触 HIV 的试验均需在生物安全三级(biological safety level 3,BSL 3)实验室内进行,并制定有相应的安全防护措施。 在 HIV 灭活试验时,必须严格按照有关安全规定进行。(4
2、)试验分组1)试验组。根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计,设立适宜的浓度与作用时间组(不少于 1 个浓度,3 个作用时间),对作用时间的设计应不短于 30s。所设组应能测出使 HIV 全部灭活所需的最低有效剂量(药物浓度与作用时间)。2)阳性对照组。用去离子水代替消毒剂,按试验组规定步骤加入 HIV 悬液进行试验和培养,观察 HIV 生长是否良好。3)阴性对照组。 用不含 HIV 的完全培养基作为阴性对照,观察所用培养基有无污染,细胞是否生长良好。4)消毒剂对细胞毒性组。取 100l 待测消毒剂,加入含有100l 用完全培养基制备的 MT4 细胞悬液(含细胞 400 000 个/m
3、l)的 96 孔培养板内。置二氧化碳温箱(37)中培养 7 d,观察细胞生长情况,确定消毒剂对细胞无毒性的最高稀释度。(5)HIV 悬液定量灭活试验操作程序1)从液氮中取出冻存的 MT4 细胞,在 37 温水中迅速融化,并用细胞维持液洗涤两次后,转种于加有 10ml 完全培养基培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞对数生长期时收获细胞用于消毒试验。2)从液氮中取出冻存 HIV-1 毒种,接种于含 10ml 细胞悬液(含细胞 700 000 个/ml800 000 个/ml)培养瓶中。逐日观察病变,待3/4 细胞出现病变时,收获病毒。收获时,将培养液取出,尽快离心,并将含病毒的上清液按每管 0.
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- 艾滋病 病毒 试验
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