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1、杀灭分枝杆菌试验2.1.1.8.1 目的 在实验室内测定消毒剂杀灭悬液中或载体上分枝杆菌所需剂量,以验证对分枝杆菌(包括结核杆菌)实用消毒剂量。2.1.1.8.2 试验器材(1) 试验菌株 龟分枝杆菌脓肿亚种 ATCC 93326。(2) 培养基 分枝杆菌干燥培养基(上海奥普生物医药有限公司)。(3) 试验菌及其菌悬液或菌片的制备。(4) 中和剂 (根据 2.1.1.5 所示方法鉴定合格者)。(5) 稀释液 0.1% 胰蛋白胨的生理盐水溶液。(6) 消毒剂稀释用硬水:见附录 A。(7) 有机干扰物质:见附录 A。(8) 刻度吸管 (0.1ml、1.0ml、5.0ml)。(9) 恒温水浴箱。(1
2、0) 喷雾装置(用于喷雾消毒试验)。(11) 电力混合器。(12) 计时装置。(13) 恒温培养箱。2.1.1.8.3 龟分枝杆菌脓肿亚种 ATCC 93326 菌悬液的制备(1)取冻干菌种管,以无菌操作打开,用毛细吸管吸加适量营养肉汤于管中,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散。取含 5.0 ml10.0mlMADC 肉汤或罗氏肉汤试管,滴入少许菌种悬液,置 37培养 18h24h。用接种环取第 1 代培养的菌悬液,划线接种于分枝杆菌培养基平板上,于 37 培养 72h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落,接种于分枝杆菌培养基斜面,于 37 培养 72h,即为第 3 代培养物。密封后,在 4保存,时
3、间不得超过 6 周。(2)试验时取第 3 代斜面培养物,在分枝杆菌琼脂斜面上连续传代,培养方法与第 3 代相同。取第 5 代6 代的分枝杆菌培养基斜面新鲜培养物(72h),用 5.0ml 吸管吸取 3.0 ml5.0ml 稀释液加入斜面试管内,反复吹吸,洗下菌苔。随后,用 5.0ml 吸管将洗液移至一含有 6-7g 玻璃珠的无菌圆锥底试管中,在电动混合器混合至少5min。然后将菌液吸入到另一试管内制成菌悬液。(3)将制成的菌悬液,进行活菌培养计数(见 2.1.1.3),按其结果用稀释液稀释至所需浓度。(4)菌悬液保存在 4 冰箱内备用。当天使用不得过夜。2.1.1.8.4 试验分组试验分为下列
4、各组:(1) 试验组,按 2.1.1.7.3 规定,选定消毒剂浓度与作用时间。(2) 阳性对照组, 以硬水代替消毒剂溶液,按 2.1.1.7.3 规定程序进行试验。所得结果代表试验体系中所含受试菌的初始浓度,并以其计算消毒因子对受试菌的杀灭对数值。(3) 阴性对照组,观察同次试验用相关溶液和培养基有无污染。2.1.1.8.5 试验程序常用杀灭试验有: 悬液定量杀灭试验、载体浸泡定量杀灭试验、载体喷雾定量杀菌试验等。其操作程序详见 2.1.1.7.4,2.1.1.7.5,2.1.1.7.6。接种后的平皿应放入干净的塑料袋内,在 37中培养 1 周,观察最终结果。2.1.1.8.6 评价规定(1)
5、 产品监督检验,按产品使用说明书指定的使用浓度和作用时间,重复试验 3 次,要求悬液定量杀灭试验各次试验的杀灭对数值均 4.00 ,要求载体定量杀灭试验,各次试验的杀灭对数值均3.00,可判定该产品对分枝杆菌污染物消毒合格。(2)产品鉴定检验,按产品使用说明书指定的使用浓度和 3 个作用时间,重复试验 3 次,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间,以及最短作用时间的 1.5 倍时,各次试验的杀灭对数值均应4.00,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间的 0.5 倍时,允许杀灭对数值4.00,可判为实验室试验该产品对分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。用载体浸泡定量杀灭试验评价杀菌效果时,在产品使用说明书规定使用浓度与最短作用时间,以及最短作用时间的 1.5 倍时,各次试验的杀灭对数值3.00,在产品使用说明书规定的使用浓度与最短作用时间的 0.5 倍时,允许杀灭对数值3.00,可判为试验室试验该产品对分枝杆菌污染物消毒的有效剂量。
限制150内