总大肠杆菌检测作业指导书.doc
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1、总大肠杆菌检测作业指导书总大肠杆菌检测作业指导书1.1.培养基培养基1.1 乳糖蛋白胨培养液;1.2 三倍乳糖蛋白胨培养液;1.3 品红亚硫酸钠培养基;1.4 伊红美蓝培养基。2 2步骤步骤2.1 生活饮用水2.1.1 初发酵试验:在二个装有已灭菌的 50ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中,以无菌操作各加入已充分混匀的水样 100ml;在 10 支装有已灭菌的 5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管) ,以无菌操作加入充分混匀的水样 10ml,混匀后置于 37恒温箱培养 24h。2.1.2 平板分离:经初发酵试验培养 24h 后,发酵试管盐酸变黄为产酸,小玻璃倒管内有气泡
2、为产气,将产酸产气及只产酸发酵管,分别用接种环划线接种于品红亚硫酸钠培养基上,置于 37中培养 1824h,挑选符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。2.1.3 复发酵试验:上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌,则挑选该菌落的另一部分接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中,每管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落 13 个,报告每升水样中的大肠菌群数。2.2 水源水2.2.1 将水样作 1:10 稀释;2.2.2 于各装有 5ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的五个试管中,各加 10ml 水样;于各装有 10ml 乳糖蛋白胨培养液的五个试管中,各加 1ml 水样;于各装
3、有 10ml 乳糖蛋白胨培养液的五个试管中,各加入 1ml 1:10 稀释的水样。共计 15 管,三个稀释度,将各管充分混匀,置于37恒温箱培养 24h。2.2.3 平板分离:经初发酵试验培养 24h 后,发酵试管盐酸变黄为产酸,小玻璃倒管内有气泡为产气,将产酸产气及只产酸发酵管,分别用接种环划线接种于品红亚硫酸钠培养基上,置于 37中培养 1824h,挑选符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。2.2.4 复发酵试验:上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌,则挑选该菌落的另一部分接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中,每管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落 13 个,报告每升水样中的大肠菌群数。2.2.5 根据证实总大肠菌群存在的阳性管数查表即求得每 100ml 水样中存在的总大肠菌群数。
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