罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序.doc
《罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序.doc(4页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、罗氏公司罗氏公司 TUNEL 细胞凋亡检测程序细胞凋亡检测程序 作者:Roche 发表于:2009-03-06 14:54 来源:丁香园(In situ cell death detection kit-POD 法)法)一、一、 原理:原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核 DNA 的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的 dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂 DNA 的 3-OH 末端,并与连接辣根过氧化酶(
2、HRP,horse-radish peroxidase)的荧光素抗体特异性结合,后者又与HRP 底物二氨基联苯胺(DAB)反应产生很强的颜色反应(呈深棕色),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 断裂,因而没有 3-OH 形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价,以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。二、二、 器材与试剂器材与试剂器材:光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒(塑料饭盒与纱布)、塑料盖玻片或封
3、口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等;试剂:试剂:试剂盒含 TdT 10、荧光素标记的 dUTP 1、标记荧光素抗体的 HRP;自备试剂:PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇(100、95、90、80、70%)、DAB 工作液(临用前配制,5 l 20DAB+1L 30%H2O2+94 l PBS)、Proteinase K 工作液(10-20 g/ml in 10 mM Tris/HCl, pH 7.4-8)或细胞通透液(0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate,临用前配制)、苏木素或甲基绿、DNase 1(3000 U/ml 3 U/ml in 50 m
4、M Tris-HCl,pH 7.5, 10 mM MgCl2,1 mg/ml BSA)等。三、三、 实验步骤实验步骤操作流程图:操作流程图:制作石蜡切片脱蜡、水合细胞通透加 TUNEL 反应液加 converter-POD与底物 DAB 反应显色光学显微镜计数并拍照。具体操作步骤:具体操作步骤:1. 用二甲苯浸洗 2 次,每次 5min;2. 用梯度乙醇(100、95、90、80、70%)各浸洗 1 次,每次 3min;3. PBS 漂洗 2 次;4. 用 Proteinase K 工作液处理组织 15-30 min 在 2137C(温度、时间、浓度均需摸索)或者加细胞通透液 8min;5.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 公司 tunel 细胞 检测 程序
限制150内