钩端螺旋体菌苗制造及检定规程.doc
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1、钩端螺旋体菌苗制造及检定规程钩端螺旋体菌苗制造及检定规程本品系用各地区主要的钩端螺旋体流行菌型,经培育、杀菌后,按型别配成单价或多价菌苗,用于预防钩映螺旋体病。1 1 菌种菌种1.1 菌种来源制造菌苗用之菌种,由中国药品生物制品检定所分发或经同意。疫情需要时,新分离的菌种经与质量检定部门会同检定符合规程要求,并经中国药品生物制品检定所同意后方可用于生产。1.2 菌种检定。生产用的菌种应通过体重 120220g 的豚鼠传代,23 天后或濒死前抽取心血或摘取肝组织,接种生产用养基或其他适宜的培养基,并培育传至 4 代以上即可进行各项检定。1.2.1 培养特性将上述菌种搁于生产培养基,接种量在 5%
2、以下,2832培育 510 天,钩端螺旋体菌数应达每视野 100 条/400x 以上。培养物应透明,微带乳光,摇动时稍有云雾状混浊,菌形要求整齐,运动活泼,两端形成钩状。1.2.2 血清凝集反应用 310 天的活培养物,每视野 50100 条/400x,运动良好,且无自凝的钩端螺旋体,与特异性血清做定量凝集反应,其凝集效价应达血清原效价之半。终点效价以菌数减少50%(+)为判定标准。新菌种要求用凝集素交叉吸收试验法定型。1.2.3 毒力试验用体重 180220g 的健康豚鼠 6 只,分成两组,弱毒、强毒株分别各皮下注射培育 510 天,每视野 50100 条/400x活培养物 2ml。弱毒株注
3、射后 48 小时抽取心血,按 1%量接种于生产培养基或其他适宜培养基 2 支,培育 14 天,镜检。要求培育全部阳性,判为合格。强毒株注射后,观察 10 天,至少应有2 只豚鼠因患钩端螺旋体病死亡,判为合格。1.2.4 免疫力试验用培育 510 天每视野 70100 条/400x 经 5658加温1 小时或 0.3%(ml/ml)苯酚杀死的钩端螺旋体培养物,以生理盐水做 3 倍稀释,免疫体重 120220g 健康豚鼠 3 只(对照组 3只应同时饲养),皮下免疫 2 次,第 1 次 0.5ml,第 2 次 1ml,间隔 5 天,末次注射后 1012 天用同株或同型异株培育 510天每视野 501
4、00 条/400x 的培养物 2ml 进行皮下攻击。强毒株:攻击后观察 10 天,免疫组豚鼠应健存,外观及食欲正常,不耸毛,运动活泼,体重增加,解剖无黄疸。对照组豚鼠至少应有 2 只患钩端螺旋体病死亡,判为合格。弱毒株:攻击后,24 小时抽取心血,接种 2 管 5%8%兔血清培养基,每管 12 滴(约为 1%接种量)。培育 14 天。免疫组心血培养要求 2/3 以上为阴性,对照组均为阳性,判为合格。1.2.5 抗原性试验用培育 510 天每视野 70100 条/400x 经 56加温 1 小时杀死的培养物,静脉免疫体重 2.02.5kg 的健康家兔 3 只,各按 1ml、2ml 与 5ml,共
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