(江苏专用)2019年高考生物一轮总复习 第12单元 生物技术实践 第1讲 微生物的分离与培养学案.pdf
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1、第第 1 1 讲讲微生物的分离与培养微生物的分离与培养考纲考情考查内容等级要求微生物的分离和培养B17 年-非选T31 考查微生物的分离与培养选择相关知识16 年多选T25 考查微生物的选择的相关知识15 年-单选T19 以文字叙述的形式考查单选微生物分离与培养实验15 年非选-T31 微生物的分离与培养考查详情某种微生物数量的测定,C,15 年单选T13 考查血细胞计数板的使用微生物的应用,B,14 年非选T30 结合 胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验考查微生物的分离和培养的操作过程及注意事项13 年单选T18 结合废水处理问题考查微生物的分离和培养的操作过程及注意事项13 年多选T24 探
2、究微生物对秸秆的分解作用知识整合一、微生物的培养1 1培养基(1)概念:人们按照微生物对_的不同需求,配制出供其_的营养基质。(2)营养组成:一般都含有_和无机盐。此外,还需要满足微生物生长对_、氧气以及_的要求.(3)种类按照物理状态可分为:_培养基、半固体培养基和_培养基。按化学成分可分为:_、合成培养基和_培养基。按功能可分为:基础培养基、_、鉴别培养基等。2 2微生物培养的基本技术(1)无菌操作技术含义:指在培养微生物的操作中,所有防止_的方法.关键:防止_的入侵.具体措施消毒a特点:使用较为 _的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体_(不包括芽孢和_)。b常用方法:煮沸消毒
3、法、_、化学药剂消毒法.灭菌a特点:指使用强烈的理化因素杀死物体内外 _,包括芽孢和孢子。b常用方法:_灭菌、干热灭菌、_灭菌、紫外线消毒。(2)接种技术平板划线法:是通过_在琼脂固体培养基表面_的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。_法:是将菌液进行一系列的 _,然后将_的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。二、微生物的分离与计数1 1微生物的分离(1)原理:根据微生物对 _等要求的不同,通过只提供目的微生物生长的必需条件,或加入_使非目的微生物不能生长,从而达到_的目的。(2)鉴定依据:_的特征。(3)方法:_和_。2 2微生物的数量测定准备实验器材:无菌条件采集土壤,
4、制备悬液:配成_的系列悬液选择适于分离特定微生物的培养基:平板培养基的制备接种:无菌操作培养与观察:_计数菌落:选取_的一组为代表,进行统计每克土壤样品的细菌数某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数稀释倍数取样体积(mL)3 3分解纤维素的微生物的分离- -纤维素分解菌的筛选(1)取样:选择富含_的环境.(2)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上制备鉴别培养基:主要的碳源是_刚果红染色法a先培养_,再加入刚果红进行颜色反应。b倒平板时加入_。考点突破考点 1 1无菌操作技术与微生物的实验室培养1 1。消毒和灭菌的区别条件较为温和的物理或化学方法日常用品不耐高温的液体消毒煮沸消毒法巴氏消毒法结果
5、仅杀死物体表面或内部的部分微生物常用方法应用范围化学药剂消毒法用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源灭菌,强烈的理化因素,杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子,灼烧灭菌法,接种工具干热灭菌法,玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌法,培养基及容器2 2三种常用灭菌方法的比较灭菌方法适用材料或用具接种环、接种针或其他灼烧灭菌金属工具玻璃器皿(吸管、培养干热灭菌皿)和金属用具等高压蒸汽灭菌30 min培养基等灭菌条件酒精灯火焰的充分燃烧层干热灭菌箱内,160170灭菌时间直至烧红1 h2 h高压蒸汽灭菌锅内;100kPa,121 15 min3 3。平板划线法与稀释涂布平板法的比较(1)平板划线法(如图 1
6、所示)几种平板划线方法示意图图 1(2)稀释涂布平板法系列稀释操作(如图 2 所示)图 2涂布平板操作(如图 3 所示)图 3(3)两种纯化细菌方法(平板划线与稀释涂布平板)比较项目平板划线法优点可以观察菌落特征,对混合菌进行分离缺点不能计数适用范围适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数,可以观察菌落特征吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌1平板划线时注意事项(1)接种环的灼烧第一次划线前:杀死接种环上的微生物,避免污染培养物每次划线前:杀死残留菌种,保证每次划线菌种来自上次划线末端划线结束后:杀死残留菌种,避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后,要冷却后
7、再进行操作,以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破2稀释涂布平板注意事项(1)稀释操作时:每支试管及其中的 9 mL 水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰 12 cm 处(2)涂布平板时涂布器用体积分数为 70%酒精消毒,取出时,让多余酒精在烧杯中滴尽 ,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不要接触任何物体3“倒平板的意义平板冷凝后倒置培养,使培养基表面的水分更好地挥发 ,防止皿盖上水珠落入培养基造成污染
8、例 1(2016江苏高考)(多选)漆酶属于木质降解酶类,在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。如图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程,相关叙述正确的是() A生活污水中含有大量微生物,是分离产漆酶菌株的首选样品 B筛选培养基中需要加入漆酶的底物,通过菌落特征挑出产漆酶的菌落 C在涂布平板上长出的菌落,通过划线进一步纯化 D斜面培养基中含有大量营养物,可在常温下长期保存菌株1空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降 .某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:配置培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);制作无菌平板;
9、设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;将各组平板置于 37恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:(1)该培养基中微生物所需的氮来源于 _。若要完成步骤,该培养基中的成分 X 通常是_。(2)步骤中,实验组的操作是_。(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了 _现象。若将 30(即366)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法 _(选填“正确”或“不正确”)。考点 2 2生物的分离与计数1 1测定微生物数量的方法(1)直接计数法:常用的是显微镜直接计数法。(2)间接
10、计数法:常用的是稀释平板计数法。2 2测定微生物数量方法的实际应用(1)土壤中好氧型细菌的计数:制备土壤稀释液:取土壤表层 35 cm 处的土样;制备系列稀释液。取样及倒平板:该实验的接种方法是稀释涂布平板法。培养。观察记录结果:计算每克土壤样品菌数。(2)检测某种食品中的细菌总数和大肠杆菌菌落数一般说来,大肠杆菌菌落总数越多,说明食品的卫生质量越差。(3)土壤中分解尿素细菌的计数某些细菌中含有尿素分解酶,能将培养基中的尿素分解成氨,该物质的水溶液会使酚酞指示剂呈现红色.3 3制备系列稀释液的方法将 1 g 土样放入 99 mL 无菌水中,制成 10 倍的稀释液,用 1 mL 无菌移液管吸取上
11、述浓度的溶液 0.5 mL,移入装有 4.5 mL 无菌水的试管中,即配制成 10 倍的稀释液,用同样的方法可以配制成 10 、10 、1045632倍的稀释液,将待测样品进行稀释的目的是使微生物细胞分散开 ,使实验结果更接近真实值。4 4分离微生物实例【分解纤维素的微生物的分离】(1)纤维素酶组成:纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即 C1 酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶。作用纤维素错误错误! !纤维二糖错误错误! !葡萄糖(2)纤维素分解菌的筛选原理筛选方法:刚果红染色法,即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基:以纤维素为唯一碳源的选择培养基.实验流程土壤取样:富含纤维素
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