2022年蜂花粉提取物抗氧化作用研究报告 .pdf
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1、个人资料整理仅限学习使用蜂花粉提取物抗氧化作用的研究厉 阗,曹 炜,宋纪蓉西北大学化工学院,陕西西安, 710069)摘要 :为进一步开发利用蜂花粉资源,研究5 种蜂花粉活性成分的抗氧化性。采用超声法,以甲醇为溶剂提取5 种蜂花粉活性成分;测定提取的5 种蜂花粉活性成分对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率和脂质过氧化的抑制率。结果表明:5 种蜂花粉均具有较强的抗氧化作用,其中荞麦花粉甲醇提取物对超氧阴离子的清除作用和脂质过氧化的抑制能力最强;油菜花粉甲醇提取物对羟基自由基和二苯代苦味酰0089-06生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学研究证明,衰老、癌症及炎症
2、等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系1 。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应,造成相关细胞结构与功能的破坏,其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤,使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下,如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力,人体就会加速衰老、易患疾病。天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用,同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此,对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究,己得到普遍关注2。花粉是植物的雄性生殖细胞,它存在于雄蕊的花药之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用自己的唾液和花蜜粘合形成的颗
3、粒,比单一花粉更有营养价值3。蜂花粉中含有黄酮类、维生素、激素、核酸、酶类和微量元素,具有特有的抗衰老作用,是良好的抗氧化食品。蜂花粉的种类不同,所含成分有很大区别,因此研究不同种类蜂花粉的抗氧化作用具有重要的价值。本文研究蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子、羟基自由基、 DPPH 自由基的清除与脂质过氧化的抑制作用,通过对比不同蜂花粉对氧自由基的清除率和脂质过氧化的抑制作用,为开发利用蜂花粉资源提供依据。1 材料与方法1.1材料1.1.1 样品与试剂油菜蜂花粉、荞麦蜂花粉、茶叶蜂花粉、芝麻蜂花粉、益母草蜂花粉由陕西老蜂农蜂业有限责任公司提供;二苯代苦味酰自由基( DPPH为Sigma公司产品,分析
4、纯;甲醇、硫代巴比妥酸 中加入 7.5 L用10mmol/LHCl 配成的 50mmo1/L 邻苯三酚溶液,迅速混匀,倒入光径cm的石英比色杯内,在325nm波长光线下,每隔30 s测吸光值 / A自氧化 100% 式中:A自氧化为自氧化对照值,A样品为样品值。2)蜂花粉对羟基自由基的清除作用5,6。在 10 mL 硬质试管中,依次加入KH2PO4-K2HPO4(PH7.4缓冲液 0.4 mL,一定量的样品液0.05 mL,定容为 1.0 mL。然后,将试管置于37的恒温水浴锅中保持1 h,取出,迅速添加1 mL 10% TCA( 三氯乙酸 及1% TBA 1 mL,在100沸水中加热15mi
5、n,取出,冷却,于532 nm处测吸光值。按下式计算清除率抑制率 = A模型-(ADR-A样品/A样品 100% 式中: A模型为模型管吸光度不加样品), ADR 为加入清除剂和DR后的吸光度, A样品为样品本身的吸光度/AC 100% 4)蜂花粉对脂质过氧化的抑制作用8。取 0.2mL卵磷脂溶液,加入样品,加入50 L FeSO4(347.5 mg FeSO4,35 mg Vc,定容至 25 mL溶液,加 PBS缓冲液 (p 7.4定容至 3 mL ,37育温 40 min,每 5 min摇匀一次。然后,加入TCA 和1%硫代巴比妥酸 1 mL ,摇匀, 100水浴 15 min,5000
6、r/min 离心 10 min,于 532 nm处测定吸光度,用蒸馏水做空白。抑制率 =(A模型 A样品/(A模型 A空白 100%式中:A模型为模型管的吸光度,A样品为样品的吸光度,A空白为空白管的吸光度。2 结果与分析2.1 对超氧阴离子自由基的清除作用精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页个人资料整理仅限学习使用超氧阴离子自由基是第一个生成的氧自由基,又是所有氧自由基的前身,可以转化为其他氧自由基。因此,对超氧阴离子自由基的清除可以有效地减少氧自由基的生成,具有非常重要的意义。图1为5种蜂 花粉甲 醇提 取 物对超
7、 氧 阴离 子自由 基的清 除作 用 。由图 1可知: 5种蜂花粉对超氧阴离子自由基均有一定的清除能力,且清除率随提取物加入量的增加而增大,清除能力依次为荞麦蜂花粉芝麻蜂花粉油菜蜂花粉茶叶蜂花粉芦丁对照品益母草蜂花粉;加入量 20 L时,荞麦蜂花粉的清除率达27.2%,其他 4种蜂花粉的抑制率7.4%16.9%,表明此用量下的5种蜂花粉清除率较低;随着加入量进一步增大,5种蜂花粉和芦丁对照品清除率逐渐增大,当加入120 L时荞麦、芝麻、油菜、茶叶、芦丁、益母草蜂花粉的清除率分别为92.1%、86.5%、83.2%,、 76.3%、70.2%、64.3%,表明此用量下的荞麦、芝麻、油菜蜂花粉、茶
8、叶蜂花粉提取物的清除能力强,而益母草蜂花粉提取物的清除能力相对弱。图 15 种蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子自由基的清除作用Fig.1 Scavenging Effect of Five Kinds of Bee Pollen Extracts on Superoxide Radical2.2 对羟基离子自由基的清除作用羟基自由基是活性氧中最活泼的自由基,也是毒性最大的自由基,几乎能与活细胞中任何分子发生反应,且反应速度极快。图2为5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基的清除作用。清除率/%加入量 / L 荞麦蜂花粉芝麻蜂花粉油菜蜂花粉茶叶蜂花粉芦丁对照品益母草蜂花粉020406080100050
9、100150200荞麦蜂花粉芝麻蜂花粉油菜蜂花粉茶叶蜂花粉芦丁对照品益母草蜂花粉清除率/%60 70 80 90 100 110 0 10 20 30 加入量 / L 精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 6 页个人资料整理仅限学习使用图2 5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基的清除作用Fig .2 Scavenging effect on OH of Five Kinds of Bee pollen extracts从图 2可见: 5种蜂花粉甲醇提取物对羟基离子自由基均有较强的清除能力,且清除率随提取物加入量的增加而增大,清
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