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1、血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书(ELISA)1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原,配以酶标记抗原(HBsAg-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗体(HBsAb)。2. 标本采集2.1 采集前病人准备:受检者应空腹2.2 标本种类:血清或血浆2.3 标本要求:采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。3. 标本储存:2-8保存不应超过1周,-20不应超过3个月,-70长期保存,应避免反复冻融。4. 标本运输:密封,室温运输。5. 标本拒收标准:污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂
2、6.1 试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司。6.3 包装规格:96Test/Kit6.4 试剂盒组成:HBsAb微孔板,HBsAb酶标记抗原,HBsAb阳性对照血清,HBsAb阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期:2-8避光保存,有效期9个月。7. 仪器设备7.1 仪器名称:自动酶标仪7.2 仪器厂家:KHB7.3 仪器型号:ST3608. 操作步骤8.1 平衡:将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。8.2 配液:浓缩洗涤液配制前充分摇匀
3、(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。8.3 编号:将微孔条固定于支架,按序编号。8.4 加样:分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。8.5 加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50ml,轻拍混匀。8.6 温育:置37温育60分钟,室温平衡5分钟。8.7 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。8.8 显色:每孔加入底物A、B各50ml,轻拍混匀,置37暗处15分钟。8.9 终止:每孔加终止液50ml,混匀。8.10 测定:用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定
4、时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。9. 结果判断与分析9.1 临界值(C.O.)的计算:临界值=阴性对照孔OD值N2.1,阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算。9.2 结果判定:样品OD值S/C.O=1者为HBsAb阳性 样品OD值S/C.O1者为HbsAb阴性10. 质量控制每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。11. 参考范围阴性或阳性12. 临床意义HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。13.
5、操作性能:灵敏度高,特异性好。14. 方法局限性:样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。15. 注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。如果滴加,滴加前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传染源处理。15.5 封口膜使用说明15.5.1 微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。15.5.2 微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果。16. 当检测系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:应保证所有操作步骤正确无误;可以比对阴阳对照,肉眼判读;无法准确判读者,应留样待系统正常后复查。17. 参考文献:中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程(第二版)412页。18. 其它:必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
限制150内