血清丙氨酸氨基转移酶测定.doc
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1、血清丙氨酸氨基转移酶测定血清丙氨酸氨基转移酶测定 1 1 检验目的检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果 的准确。 2 2 实验原理实验原理 本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础,所采 用的反应原理与反应式如下。 样本中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸的氨 基转换至 -氧代戊二酸,生成丙酮酸和 L 谷氨酸。 丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶(LDH)还原为 L-乳酸 的同时还原型辅酶 I(NADH+ H+)被氧化为辅酶 I(NAD+) , 而使波长 340nm 处的吸光度值下降。通过对波长 340nm 处 吸光度值的下降速率进行监测,即可测得样本中丙氨酸氨 基转
2、移酶(ALT)的活性。 (3)样本中内源性丙酮酸的干扰,可由试剂中的乳酸脱 氢酶(LDH)在测定的延迟时间内快速、完全地消除,不会 对测定产生干扰。 ALT L-丙氨酸 + -酮戊二酸 丙酮酸 + L- 谷氨酸 丙酮酸+ NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O 3 3 标本标本 3.13.1 病人准备:病人准备:12 小时禁食。 3.23.2 类型:类型:血清。 3.3.3.3. 标本存放:标本存放:3 天内的活性损失:28保存: 10%;1525保存:17%;标本稳定性:-20保存至少 可稳定 4 周。 3.43.4 标本运输:标本运输:常温条件下保存运输。 3.53.5 标
3、本拒收标准:标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。 4 4 实验材料实验材料 4.14.1 试剂:试剂:上海复星长征医学科学有限公司 ALT 试剂盒 (沪食药监械(准)字 2014 第 2400166 号 YZB/沪 1546- 40-2014) 4.1.14.1.1 试剂组成试剂组成 LDH(乳酸脱氢酶) 试剂 1(R1): L 丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶 1820U/L NADH0.26mmol/ L Tris 缓冲液 80mmol/L 试剂 2(R2): Tris 缓冲 液 80mmol/L 氧代戊二 酸 36mmol/L EDTA 5.0mmol/ 4.1.24.1.2
4、试剂准备:试剂准备:试剂为即用式。 4.1.34.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂稳定性与贮存:在 28避光、密封的储存条 件下,试剂盒自生产之日起有效期为 12 个月。 4.1.44.1.4 变质指示:变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度, 或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续 使用。 4.1.54.1.5 注意事项:注意事项:试剂中含有稳定剂,可能存在一定的刺 激作用和毒性,请勿直接接触皮肤及眼睛。一旦接触,即 用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.24.2 校准品:校准品:使用上海复星长征医学科学有限公司提供的 ALT 校准品对自动分析仪进行校准。 4.34.3 质控品:质
5、控品:使用正常值、病理值复合控制品。 5 5 仪器仪器 AU2700 生化分析仪,罗氏 P800 生化分析仪,西门子 ADVIA-2400 生化分析仪,东芝 TBA-120 生化分析仪 6 6 操作步骤操作步骤 6.16.1 样品的准备:样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的 位置。 6.26.2 试剂的检测:试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体 积等确认无误后方可进行测定。 6.36.3 项目基本参数:项目基本参数:参见生化检验 AU2700 生化分析仪,罗 氏 P800 生化分析仪,西门子 ADVIA-2400 生化分析仪,东 芝 TBA-120 生化分析仪项目测定参数。
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