血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书.doc
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1、血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书(ELISA)原理在微孔条上预包被丙型肝炎病毒(HCV)重组嵌合抗原,采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔,在随后的温育过程中,若样品中含特异抗体,则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相,再加入酶标记的第二,最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色。标本采集2.1 采集前病人准备:受检者应空腹2.2 标本种类:血清或血浆2.3 标本要求:采集病人静脉血2ml,室温放置不超过4小时,分离血清备用。标本储存:2-8C保存不应超过1周,-20C不应超过3个月,-70C长期保存,应避
2、免反复冻融。标本运输:密封,室温运输。标本拒收标准:污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。试剂6.1 试剂名称:丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家:河南华美生物工程有限公司。6.3 包装规格:96Test/Kit6.4 试剂盒组成:包被反应板,样品稀释液,酶标记抗体,阳性对照血清,阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,密封袋。6.5 试剂储存条件及有效期:2-8C避光保存,有效期6个月。仪器设备7.1 仪器名称:自动酶标仪7.2 仪器厂家:KHB7.3 仪器型号:ST360操作步骤8.1 平衡:将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25C),微孔板
3、开封后,余者及时以自封袋封存。8.2 配液:浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。8.3 编号:将微孔条固定于支架,按序编号。8.4 加样品稀释液:用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液,每孔100ml,空下四孔准备加对照。8.5 加标本和留空白:将每份待检标本各10ml分别加入已有样品稀释液的各孔中,留下一孔不加标本作空白对照,标好位置。8.6 加对照:在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔,阳性对照三孔,每孔100ml,标好位置。对照应在所有标本加完以后再加,以保证阈值准确性。8.7 温育(一):充分混匀,加上封板膜,置
4、37温育30分钟。8.8 洗涤(一):用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。8.9 加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体100ml,轻拍混匀。8.10 温育(二):充分混匀,加上封板膜,置37温育30分钟。8.11 洗涤(二):用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。8.12 显色:每孔加入底物A、B各50ml,轻拍混匀,置37暗处20分钟。8.13 终止:每孔加终止液50ml,混匀。8.14 测定:用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。结果判
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