基因工程的基本操作程序--公开课ppt课件.ppt
《基因工程的基本操作程序--公开课ppt课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基因工程的基本操作程序--公开课ppt课件.ppt(44页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取一、目的基因的获取1.1.目的基因目的基因符合人们需要,能编码蛋白质的基因符合人们需要,能编码蛋白质的基因2.2.基因文库基因文库 P9P9 将含有某种生物将含有某种生物不同基因不同基因的许多的许多DNA片断片断,导入到,导入到受体菌受体菌的群体中,的群体中,各个受体菌分别含各个受体菌分别含有这种生物的不同基因有这种生物的不同基因,称为基因
2、文库。,称为基因文库。种种类类基因组文库基因组文库:含有一种生物的含有一种生物的全部基因全部基因部分基因文库部分基因文库:只包含了一种生物的只包含了一种生物的部分基因部分基因, 如:如:cDNA文库文库某种生物的某种生物的全部全部DNADNA限制酶限制酶DNADNA片段片段DNADNA片段与载体连接片段与载体连接重组重组DNADNA基因组文库基因组文库导入受体菌中储存导入受体菌中储存基因组文库的构建基因组文库的构建生物生物某个发育时期某个发育时期的的mRNAmRNA单链单链DNADNA双链双链cDNAcDNA片段片段重组重组DNADNA与载体连接与载体连接cDNAcDNA文库文库反转录酶反转录
3、酶DNADNA聚合酶聚合酶导入受体菌中储存导入受体菌中储存 cDNA文库的构建文库的构建-逆逆转转录法:录法: 基因组基因组DNADNA文库与文库与cDNAcDNA文库的比较文库的比较3.3.获取目的基因的方法获取目的基因的方法(1 1)从基因文库中获取)从基因文库中获取(2 2)利用)利用PCRPCR技术扩增技术扩增(3 3)人工合成)人工合成依据:依据:目的基因的有关信息。目的基因的有关信息。如:如:根据基因的核苷酸序列根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色体上的位置基因在染色体上的位置 基因的转录产物基因的转录产物mRNAmRNA 基因翻译产物蛋白质等特性基因翻译产物蛋白
4、质等特性(1)从基因文库中获取目的基因)从基因文库中获取目的基因(2 2)利用)利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念:概念:PCRPCR全称为全称为_,是一项,是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 原理:原理:_多聚酶链式反应多聚酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制模板DNAPCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点50引物1引物2DNA引物95PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点7
5、2第1轮结束第2轮开始PCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点955072TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理vPCR反应条件vPCR过程vPCR的特点72第2轮结束过程:过程:a a、变性变性(90-9590-95):双链):双链DNADNA在受热下,在受热下,_断裂,形成断裂,形成_b b、复性复性(55-6555-65):温度降低,):温度降低,引物引物与单链与单链DNADNA结合,形成局部结合,形成局部_。 c c、延伸延伸(70-7570-75):在):在TaqTaq酶酶的作用下,合成与的作用下,合成与模板互补的模板互补的_。 氢键氢键单链单链DNADNA双链双
6、链DNADNA链链方式:以方式:以_方式扩增,即方式扩增,即_条件:前提条件条件:前提条件:_:_ 结果:结果:指数指数2 2n n短时间内大量扩增目的基因短时间内大量扩增目的基因已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列DNA复制复制PCR技术技术场所场所解旋方式解旋方式酶酶PCR技术扩增与技术扩增与DNA复制的比较复制的比较高温高温解旋酶解旋酶体外复制体外复制主要在细胞核内主要在细胞核内热稳定的热稳定的DNA聚合酶聚合酶细胞内的细胞内的DNA聚合酶聚合酶(3)人工合成法:)人工合成法: 在在基因较小,核苷酸序列已基因较小,核苷酸序列已知知的情况下,的情况下,可以利用可以利用DNA合成合成仪仪
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基因工程 基本 操作 程序 公开 ppt 课件
限制150内