黑曲霉发酵柠檬酸.doc
《黑曲霉发酵柠檬酸.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《黑曲霉发酵柠檬酸.doc(19页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date黑曲霉发酵柠檬酸黑曲霉发酵柠檬酸黑曲霉发酵生产柠檬酸(中北)生物技术 18083108 陈园园摘要:黑曲霉,半知菌亚门,丝孢纲,丝孢目,丛梗孢科,曲霉属真菌中的一个常见种。广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中,是重要的发酵工业菌种。大多数曲霉菌如泡盛曲霉、米曲霉、温氏曲霉、绿色木霉和黑曲霉都具有产柠檬酸的能力,而黑曲霉的产酸能力更强。黑曲霉从土壤中分离培养,土
2、壤来源有要求。黑曲霉和黑根霉菌种用于发酵产柠檬酸,了解产物发酵生产的机理,柠檬酸发酵的发酵条件,掌握发酵过程步骤,了解产物提取的几种方法,学习利用沉淀法提取柠檬酸的原理,掌握沉淀法提取柠檬酸的方法是本次实验的目的要求。关键词:黑曲霉、黑根霉、柠檬酸实验材料和试剂:样品:新鲜土壤样品(来源于食堂垃圾堆处)培养基:查氏培养基、马铃薯培养基无菌水:带有玻璃珠装有20mL无菌水三角瓶试剂:400U/mL庆大霉素液、10苯酚、酚酞指示剂、碳酸钙、0.1M NaOH 、0.1M H2SO4实验器材:无菌培养皿、培养箱、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴、圆底烧瓶、抽滤瓶、玻璃棒
3、、抽滤设备、冰箱实验步骤一黑曲霉、黑根霉菌种的分离和培养1.黑曲霉的分离培养土壤样品的采集用取样铲,将表层5cm左右的浮土除去,取525cm处的土样1025g,装入事先准备好灭菌容器内扎好。编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离,以免微生物死亡。制平板:在融化好的查氏培养基中加入链霉素0.2mL/瓶制3块PDA培养基、3块查氏培养基平板。制备土壤稀释液:1. 称取土壤2g,放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中,同时加入3滴10苯酚溶液,振荡5min,即为稀释101的土壤悬液。 2. 另取无菌离心管2支,用记号笔编上102、103、104,再加入0.9
4、mL无菌水。取101的土壤稀释液,吸取0.1mL加入第一只离心管中,并在试管内轻轻吹吸数次,使之充分混匀,即成102土壤稀释液。同法依次连续稀释至103、104土壤稀释液。无菌操作法分别吸取102、103 、104土壤稀释液0.1mL,分别加在已制好的3块查氏平板培养基上。涂板用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平,静置于桌面5min。2.黑根霉的分离培养马铃薯培养基2块1号马铃薯培养基用接种环无菌操作从酒酿样品中挑取1环在上面进行划线分离,2号马铃薯培养基取安琪菌剂0.1g加入10mL带玻璃珠的无菌水三角瓶进行稀释溶解,取稀释液0.1mL在上面进行均匀涂布。将划好的培养基置于517房间30
5、培养箱内正置培养3天,进行结果观察和转接。3.菌种检测和扩培培养72小时后,星期一过来,检查查氏培养基和划线马培,看是否有产酸的曲霉菌落,和典型的根霉菌落,并显微检测其是否为黑曲霉和黑根霉。确证后分别将其转接至剩余的两块PDA平板培养基上扩增培养和保藏。二黑曲霉发酵柠檬酸1.种子液制备菌种获得(纯种),无菌操作,取5mL无菌水至黑曲霉平板上,用接种环轻轻刮下孢子,用枪吹吸数下制成孢子悬液。2.液体深层发酵无菌操作,取3mL孢子悬液接种于玉米粉摇瓶发酵培养基中。在转速为200rpm旋转摇床上,30培养56天。 三柠檬酸的提取把发酵完成后的发酵液中的目的产物提取出来,并通过精制成为合格产品,该过程
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 曲霉 发酵 柠檬酸
限制150内