扩增基因全长实验技术ppt课件.ppt
《扩增基因全长实验技术ppt课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《扩增基因全长实验技术ppt课件.ppt(16页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、扩扩增增基基因因全全长长实实验验技技术术获取基因全长简介获取基因全长简介 基因初步验证基因初步验证 基因全长获取(基因全长获取(RACE技术)技术) RACE产物鉴定产物鉴定 4123以介绍以介绍5RACE技术为主技术为主5对序列进行生物信息学分析对序列进行生物信息学分析 目录目录v为什么要获取基因全长?为什么要获取基因全长?v什么是什么是EST?v获取基因全长基本流程?获取基因全长基本流程? 获取基因全长简介获取基因全长简介EST (Expressed Sequence Tag)表达序列标表达序列标签签是从一个随机选择的是从一个随机选择的cDNA 克隆,进行克隆,进行5端和端和3端单一次测序
2、挑选出来获得端单一次测序挑选出来获得的短的的短的cDNA 部分序列部分序列,代表代表一个完整基因的一小部分一个完整基因的一小部分,在在数据库中其长度一般从数据库中其长度一般从20 到到7000bp 不等不等,平均长度为平均长度为360 120bp 。 获取全长获取全长cDNA是研究是研究基因功能的关键,是基因功能的关键,是进行基因功能及产物进行基因功能及产物分析的必要前提。分析的必要前提。获取基因全长基本流程获取基因全长基本流程构建数据库构建数据库筛选筛选EST序列序列普通普通PCR进行初步验证进行初步验证RACE技术技术生物信息学分析生物信息学分析库库筛选筛选EST基因初步验证基因初步验证获
3、取基因全长获取基因全长进行全序列分析进行全序列分析以本实验室具体情况为例子以本实验室具体情况为例子生物信息学分析生物信息学分析1. Blast比对比对2. ORF比对比对3. 相似序列相似序列多重比对多重比对4. 家族成员家族成员多重比对多重比对PCR扩增扩增凝胶回收凝胶回收测序测序设计引物设计引物提取提取RNA反转录反转录PCR扩增扩增电泳检测电泳检测凝胶回收凝胶回收电泳检测电泳检测克隆克隆uPCR产物测序u凝胶回收测序u克隆后菌液测序u克隆后质粒测序基因初步验证基因初步验证RACE技术技术方法方法RACE 简介简介试剂盒试剂盒选取选取5RACE原理原理实验实验过程过程基因全长获取基因全长获
4、取cDNA末端快速扩增末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术是基于技术是基于PCR技术由已知的部分技术由已知的部分cDNA序序列来获得完整列来获得完整cDNA序列的一种方法。序列的一种方法。分为分为3RACE 和和5RACE RACE 简介简介Clontech公司公司全称全称:SMART RACE cDNA amplification kit 优点:优点:操作简便,成功率较高,全长分子的比例较高操作简便,成功率较高,全长分子的比例较高 价钱:中等偏上。价钱:中等偏上。缺点:缺点:不知道能否拿到完整的不知道能否拿到完整的5UTR.试剂盒试
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 扩增 基因 全长 实验 技术 ppt 课件
限制150内