掌握简单染色法和革兰氏染色法的原理及操作步骤ppt课件.ppt
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1、实验一实验一 细菌的形态细菌的形态结构观察和染色结构观察和染色目目 的的 要要 求求u观察细菌菌落的特征。观察细菌菌落的特征。u掌握简单染色法和革兰氏染色法的原理掌握简单染色法和革兰氏染色法的原理及操作步骤。及操作步骤。u在油镜下观察细菌个体的形态在油镜下观察细菌个体的形态。u了解了解几种细菌的特殊染色方法,包括芽几种细菌的特殊染色方法,包括芽孢、荚膜及鞭毛染色。孢、荚膜及鞭毛染色。 u了解环境微生物的检查。了解环境微生物的检查。奥林帕斯奥林帕斯( (OLYMPUS) )双筒生物显微镜双筒生物显微镜镜筒镜筒物镜转换器物镜转换器载物台载物台载物台调节纽载物台调节纽粗调节器粗调节器细调节器细调节器
2、电源电源光强调节钮光强调节钮孔径光阑孔径光阑视场光阑视场光阑双筒目镜双筒目镜摄像头摄像头物镜物镜镜座镜座镜臂镜臂荧光发射装置荧光发射装置奥林帕斯生物显微镜的使用方法奥林帕斯生物显微镜的使用方法1.1.接通电源。接通电源。2.2.打开主开关。打开主开关。3.3.转动光强调节钮,使亮度适中。转动光强调节钮,使亮度适中。4.4.把标本固定在载物台上。把标本固定在载物台上。5.5.用低倍物镜,旋转粗调和微调用低倍物镜,旋转粗调和微调来进行对焦。来进行对焦。6.6.调节双目镜筒间距和视度差。调节双目镜筒间距和视度差。7.7.再适当调节照明度。再适当调节照明度。8.8.使焦点正确地对准标本。使焦点正确地对
3、准标本。8.8.调节孔径光阑。调节孔径光阑。9.9.依次用低、中、高倍镜观察。依次用低、中、高倍镜观察。10.10.油镜观察:高倍镜下找到清晰的物象后,油镜观察:高倍镜下找到清晰的物象后,下降载物台,在标本中央滴一滴香柏油,下降载物台,在标本中央滴一滴香柏油,使油镜镜头浸入香柏油中,再细调至看使油镜镜头浸入香柏油中,再细调至看清物象为止。清物象为止。11.11.换片:另换新片,必须从第换片:另换新片,必须从第9 9条开始操条开始操作。作。 12.12.观察完毕,下降载物台,取下载物台上观察完毕,下降载物台,取下载物台上的载玻片,将的载玻片,将4 4的目镜对准载物台,的目镜对准载物台,再用擦镜纸
4、擦去镜头上的油,然后用擦再用擦镜纸擦去镜头上的油,然后用擦镜纸沾取少量乙醇镜纸沾取少量乙醇/ /水擦去残留的油,水擦去残留的油,最后用擦镜纸擦去残留的乙醇最后用擦镜纸擦去残留的乙醇/ /水。水。13.13.用毕复原:先将电压调节旋钮复原,关用毕复原:先将电压调节旋钮复原,关闭主开关,切断电源。闭主开关,切断电源。显微镜保养和使用中的注意事项显微镜保养和使用中的注意事项1.1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, ,以免损坏。以免损坏。2.2.镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度。镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度。3.3.观察标本时,必须依次
5、用低、中、高倍镜,最后用油镜。当观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。当目视目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以目视目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。免压碎玻片或损伤镜面。4.4.光强要适中,太亮不仅损伤灯泡寿命,也对眼睛有一定的伤光强要适中,太亮不仅损伤灯泡寿命,也对眼睛有一定的伤害,并且无法进行图像采集。害,并且无法进行图像采集。5.5.观察时,两眼睁开,养成能够用两眼观察的习惯,使两眼同观察时,两眼睁开,养成能够用两眼观察的习惯,使两眼同时聚焦。时聚焦。6.6.观察临时制片时,不要让玻片中的水分流到载物台上,更不观察临时制片时,
6、不要让玻片中的水分流到载物台上,更不能使酸、碱及其它化学药品与显微镜接触。能使酸、碱及其它化学药品与显微镜接触。油镜使用的原理油镜使用的原理 u油镜,即油浸接物镜。油镜,即油浸接物镜。u当光线由反光镜通过玻片当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。射,降低了视野的照明度。u若中间的介质是一层油若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相其折射率与玻片的相近近),则几乎不发生折射,),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从增加了视野的进光量,从而使物象更加清
7、晰。而使物象更加清晰。基基 本本 原原 理理 ( (一一) )简单染色法原理简单染色法原理( (二二) )革兰氏染色法原理革兰氏染色法原理( (三三) )抗酸染色原理抗酸染色原理( (四四) )芽孢染色原理芽孢染色原理( (五五) )荚膜染色原理荚膜染色原理( (六六) )鞭毛染色原理鞭毛染色原理 染色剂和染色原理染色剂和染色原理微生物染色常用染料如下表:微生物染色常用染料如下表:实验内容实验内容(简单染色的方法和步骤)(简单染色的方法和步骤)涂片涂片自然自然干燥干燥微火固定微火固定染色染色l min冲洗冲洗吸干吸干镜检镜检实验内容实验内容(革兰氏染色的方法(革兰氏染色的方法和步骤)和步骤)涂
8、片,干燥、固定涂片,干燥、固定草酸铵结晶紫染液染色草酸铵结晶紫染液染色lmin,用,用水冲洗水冲洗用革氏碘液媒染用革氏碘液媒染lmin,用水冲去,用水冲去碘液碘液用用95乙醇脱色乙醇脱色10-30s,至乙醇,至乙醇液不呈现紫色液不呈现紫色蕃红染液复染蕃红染液复染lmin,用水冲洗,用水冲洗吸干并镜检吸干并镜检实验内容实验内容(了解了解抗酸染色的方法和步骤)抗酸染色的方法和步骤)1 1制片制片 将少量草分枝杆菌制成菌悬液,将少量草分枝杆菌制成菌悬液,8080恒温水浴恒温水浴3h3h杀死菌体。取杀死菌体。取菌悬液涂片,自然干燥。菌悬液涂片,自然干燥。2 2染色染色 滴加石炭酸复红染液滴加石炭酸复红
9、染液2 2滴,覆盖涂片,在微火上加热至有蒸气出滴,覆盖涂片,在微火上加热至有蒸气出现,不断补充染液,加热现,不断补充染液,加热8 810min10min,弃染液。,弃染液。3 3脱色脱色 用用3 3盐酸乙醇液脱色,至乙醇液呈淡红色或无色。盐酸乙醇液脱色,至乙醇液呈淡红色或无色。4 4水洗水洗 滴加蒸馏水洗去盐酸乙醇。滴加蒸馏水洗去盐酸乙醇。5 5复染复染 加美蓝染液染加美蓝染液染lminlmin。6 6水洗后自然干燥、镜检水洗后自然干燥、镜检 草分枝杆菌呈现红色。若用非抗酸性菌作为对照,则菌体被染成草分枝杆菌呈现红色。若用非抗酸性菌作为对照,则菌体被染成蓝色。蓝色。实验内容实验内容(了解了解芽
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