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1、如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流HPLC性能测试【精品文档】第 8 页HPLC性能测试一、仪器性能测试1、流量准确性与重复性 泵的稳定性与流量准确与否直接相关。以100%水为流动相(经过过滤和脱气处理),设定流量为1ml/min,在泵出口处连接电子流量计,待流速稳定后连续记录5次读数,以5次读数的平均值作为流量测定值Fm ,重复上面的测定步骤3次,按照下式计算SS和SR SS =(Fm -FS)/ FS100%式中:SS流量准确度(%)Fm流量实测值,ml/min(取三次测量的平均值)FS 流量设定值,ml/min SR = SR流量重复性误差(%)Fm流量实测值,ml/min 同一组
2、测量的算术平均值,ml/min按照同样步骤测试0.1ml/min、2ml/min与5ml/min的相应指标。2、噪声与漂移 实验条件:紫外吸收波长为254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,选用C18 色谱柱,开机,平稳运行2h后,记录基线60min,利用工作站计算噪声和漂移。3、检出上限 将检测器和记录仪连接好,检测器波长选在254nm,通电稳定后,用注射器直接向检测池中注射2%异丙醇水溶液冲洗检测池至记录仪读数不变,记下此值。之后,依照上法分别注入丙酮/2%异丙醇系列水溶液(丙酮含量为0.1%、0.2%、0.3%1.0%)冲洗检测池,并记录各溶液对应的稳定记录仪读数,每个
3、溶液重复测量3次,取算术平均值。以5个丙酮含量(0.1%-0.5%)和对应的记录仪读数做标准曲线,在曲线上找出丙酮含量大于0.5%各点的读数,与对应含量的测量值做比较,测量值低于读数5%时,认为曲线弯曲,此点的浓度作为检测上限CH。二、应用性能测试1、梯度误差 由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序,A溶剂为纯水,B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液,B经由5个梯度从0变到100%(0%-20%-40%-60%-80%-100%)。将输液泵盒检测器连接(不接色谱柱),开机后以A溶剂冲洗系统,基线平稳后开始执行梯度程序,求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值(或记录仪读数),重复测量2次,计算平均值。从
4、B溶剂的含量及对应的输出信号值(或记录仪读数),按下式计算梯度误差Gci,取Gci最大者作为仪器梯度误差。 Gci=()/100%式中:Gci第i段梯度误差第i段输出信号值(或记录仪读数)平均值各段输出信号(或记录仪读数)平均值的平均值2、流速影响 在不同流速下(1ml/min、2ml/min、4ml/min)分别按照一定的色谱条件测定校准品,比较反相色谱和正相色谱、多元组分体系和单组分体系在不同流速下的测定结果及对峰面积的影响。3、波长准确度与重复性 在不同波长下分别按照一定的色谱条件测定各种标准样品的色谱图,比较设定的波长与标准样品实测波长得出波长的准确度,重复测量3次,以3次读数的平均值
5、作为波长测定值,按照下式计算Bs和BR SS =( -BS)/ BS100%式中:SS波长准确度(%)三次测量的算术平均值,nmBS 波长设定值,nm SR = SR波长重复性误差(%)Bm波长实测值,nm 三次测量的算术平均值,nm4、检出限 按照国标及药典的测定方法,待基线稳定后,进样,记录相关标准物质(单标/混标)色谱图,由样品色谱峰高和基线噪声峰高计算,按照下式计算最小检测浓度(以10ul进样量计) CL=式中:CL最小检测浓度,g/ml噪声峰高,AU(或V)c 样品浓度,g/mlH样品峰高,AU(或V)V进样体积,ul5、定性定量重复性 按照按照国标及药典的测定方法,待基线稳定后,进
6、样,记录各种标准样品(单标/混标)色谱图,记录主峰的保留时间和峰面积,重复5次。定性定量重复性按照下式计算 RSD = 式中:RSD定性定量重复性第i次测得的保留时间或峰面积n次测量的算术平均值i测量序号n测量次数三、软件性能测试根据各品牌HPLC色谱仪的软件功能特性与实际测试情况,软件测试内容如下:软件测试项目通用功能是否与实测情况相符系统控制方法编辑是 否系列编辑是 否数据监测是 否仪器控制是 否结果查看是 否历史记录是 否仪器信息是 否数据处理积分是 否校正是 否含量计算是 否报告是 否数据管理数据查看是 否数据管理是 否总体评价功能性易用度容错率四、附录:标准物质110-4 g/ml,
7、110-7 g/ml的萘/甲醇溶液110-6 g/ml,110-9 g/ml的硫酸奎宁/高氯酸水溶液110-3 g/ml,110-5 g/ml的丙三醇/水溶液紫外波长标准溶液表一:流量准确度与重复性测试表流量设定值ml/min测量值ml/minFm值ml/min值ml/minSS 值SR 值12345表二:噪声与漂移值测试表项目紫外吸收波长流量流动相噪声漂移(60min)测量值254nm1.0ml/min100%甲醇表三:检出上限测试表丙酮%0.10.20.30.40.50.60.70.80.91.0CH读数平均值表四:梯度误差测试表B溶液变化范围0%20%40%60%80%100%记录仪读数12Gci表五:不同流速影响峰面积测试表项目流速ml/min峰面积值平均值RSD123反相色谱124正相色谱124多元组分体系124单组分体系124结论表六:波长准确度与重复性测试表波长设定值nm波长标准值nm测量值值nmSS 值SR 值123表七:检出限测试表测量次数样品浓度g/ml进样量ul噪声峰高AU样品峰高AU最小检测浓度g/ml11023结论表八:定性定量重复性测试表标准样品项目测量次数平均值RSD12345保留时间峰面积保留时间峰面积保留时间峰面积
限制150内