实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
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1、精品文档,仅供学习与交流,如有侵权请联系网站删除实验一 CTAB法提取植物基因组DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组DNA的基本原理和方法。实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类),其对DNA的抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。该复合物在高盐的溶液中
2、(0.7mol/L NaCl)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB能溶于乙醇)即可使核酸分离出来。CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热(65度),且离心温度不要低于15度。实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入1.5ml离心管内。加入等体积的65预热的DNA提取缓冲液置于65的恒温水浴摇床上1-2h(1.5h)。2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒5分钟,静置5分钟,之后于12000rpm离心10分钟。3、吸取上层水相,重复步骤2一次。4、吸取上层水相,加入预冷
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