基因多态性分析.doc
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1、人 基因多态性分析一、实验目的1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。二、实验原理基因多态性(gene polymorphism)是指在一个生物群体中,同时存在两种及以上的变异型或基因型或等位基因,也称为遗传多态性(genetic polymorphism)。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义;与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记,并为分离克隆致病基因提供依据;病因未知的疾病与候选基因多态性的相关
2、性分析,可用于辅助筛选致病易感基因。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionRestriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异(多态性),且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上,使酶切位点增加或者消失,则酶切结果就会产生大小不同的片段,即片段长度多态性,再利用琼脂糖凝胶电泳分离,可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较,可确定是否变异。应用PCR-RFLP,可检测某一致病基因已知的点突变,进行直
3、接基因诊断,也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。三、器材与试剂1. 器材离心机。DNA扩增仪。电泳仪。水平电泳槽。紫外检测仪。移液器。2. 试剂口腔拭子DNA抽提试剂盒。琼脂糖。1TAE电泳缓冲液:980ml蒸馏水中加入50TAE母液20ml。50TAE母液:Tris 121g,0.5M EDTA(pH8.0)50ml,冰醋酸 28.55ml,定容至500ml。上样缓冲液(6):30mM EDTA,40%(V/V)甘油,0.05%(W/V)二甲苯青FF,0.05%(W/V)溴酚蓝。10 mg/ml溴化乙锭(EB)。DNA Marker。四、实验方法1.基因组DNA抽提细胞采集:口腔
4、拭子(消毒后的棉签)擦拭两侧脸颊各10次,采集口腔粘膜脱落细胞,将拭子转置于2mL离心管中,用剪刀将棉签部分剪下,加入DNA抽提试剂盒中的400L缓冲液GA。注意:为了保证样本不被食物或者饮料污染,取样前30分钟内请勿进食和饮水。DNA提取: 参照试剂盒说明书操作。样品保存:DNA产物应保存在-20,以防DNA降解。下次实验再用。2. DNA浓度及纯度检测可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测DNA样品的浓度与纯度。琼脂糖凝胶电泳法定性检测DNA 参照实验16 DNA琼脂糖电泳。紫外分光光度法定量检测DNA浓度及纯度参照实验20 动物肝脏DNA的提取和检测。测定浓度后,稀释至0.25ug/uL
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