2022年常用培养基配制 .pdf
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1、常用培养基LB培养基/ 升终 1 X 浓度胰蛋白胨10 g 1.0% (w/v) 酵母抽提物5 g 0.5% (w/v) NaCl 10 g 1.0% (w/v) H2O 至 1 升调节 pH值至 7.0 低盐 LB培养基/ 升终 1 X 浓度胰蛋白胨10 g 1.0% (w/v) 酵母抽提物5 g 0.5% (w/v) NaCl 10 g 0.5% (w/v) H2O 至 1 升调节 pH值至 7.0 Terrific Broth 培养基/ 升终 1 X 浓度胰蛋白胨12 g 1.2% (w/v) 酵母抽提物24 g 2.4% (w/v) 甘油4 g 0.4% (w/v) 加 H2O 至 9
2、00 ml 灭菌,冷却至 60C 后加入 100 ml 过滤灭菌的10X TB磷酸盐 (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4) SOB 培养基/ 升终 1 X 浓度胰蛋白胨20 g 2.0% (w/v) 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页,共 17 页 - - - - - - - - - 酵母抽提物5 g 0.5% (w/v) NaCl 0.5 g 0.05% (w/v) 250 mM KCl 10 ml 2.5 mM H2O 至 900 ml
3、 调节 pH值至 7.0 ,加 H2O至 990 ml 灭菌、冷却至室温。使用前加入10 ml 灭菌的 1 M MgCl2溶液10 mM SOC 培养基SOB 培养基 (1 升 ) 加入 20 ml 过滤灭菌的1 M 葡萄糖M9 基本培养基/ 升终 1 X 浓度5X M9 salts 200 ml 灭菌 H2O 至 1 升1 M MgSO41 ml 1 mM 20% 葡萄糖10 ml 0.2 (w/v) 1 M CaCl20.1 ml 0.1 mM 5X M9 Salts / 升终 1 X 浓度Na2HPO4x7H2O 64 g 47.8 mM KH2PO415 g 22 mM NaCl 2.
4、5 g 8.6 mM NH45 g 18.7 mM 添加剂/ 升终 1 X 浓度抗生素 ( 如果需要 ) 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页,共 17 页 - - - - - - - - - 氨苄青霉素50 g/ml氯霉素20 g/ml卡那霉素30 g/ml四环素12 g/ml半乳糖苷 ( 如果需要 ) X-Gal 20 g/mlIPTG 0.1 mM 培养基含有琼脂或琼脂糖琼脂 ( 平板 ) 15 g 1.5% (w/v) 琼脂 ( 软性琼脂 ) 7 g 0.7
5、% (w/v) 琼脂糖 ( 平板 ) 15 g 1.5% (w/v) 琼脂糖 ( 软性琼脂糖 ) 7 g 0.7% (w/v) 参考文献1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spri
6、ng Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用储存液10 M 醋酸铵醋酸铵385.4 g H2O 至 500 ml 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页,共 17 页 - - - - - - - - - 1 M CaCl2CaCl2x6H2O 219.1 g H2O 至 1 升100X Denhardt 溶液终浓度Ficoll 400 10 g 0.02% (w/v) 聚乙烯吡咯烷酮10 g 0.02% (w/v) 牛血清白蛋白10 g 0.
7、02% (w/v) H2O 至 500 ml 过滤灭菌后分装(25 ml), - 20C 保存0.5 M EDTA ( 乙二胺四乙酸 ) (pH 8.0)Na2EDTAx2H2O 186.1 g H2O 至 700 ml 10 M NaOH (50 ml)调节 pH值至 8.0 H2O 至 1 升10 mg/ml 溴化乙锭溴化乙锭0.2 g H2O 至 20 ml 充分混匀后4C 黑暗保存警告 :溴化乙锭是一种突变剂。使用溴化乙锭溶液时需带手套;称量其粉末时需带面具。1 M KCl KCl 74.6 g 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - -
8、- - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页,共 17 页 - - - - - - - - - H2O 至 1 升1 M MgCl2MgCl2x6H2O 20.3 g H2O 至 100 ml 1 M MgSO4MgSO4x7H2O 24.6 g H2O 至 100 ml 5 M NaCl NaCl 292.2 g H2O 至 1 升10 M NaOH NaOH 400.0 g H2O 至 1 升1 M Tris-HCl 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐Tri base 121.1 g H2O 至 800 ml 用于浓缩的HCl 调节至所需的pH值混合后加H2O至 1 升
9、3 M 醋酸钠(pH 5.2 或 7.0) (2)醋酸钠 x 3H2O 401.1 g H2O 至 800 ml 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页,共 17 页 - - - - - - - - - 用醋酸调节pH值至 7.0 或用冰醋酸调节pH值 5.2 H2O 至 1 升参考文献1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press
10、, N.Y., 1997. 2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001. 常用缓冲液10X 磷酸盐缓冲液 ( 储存液 ) (PBS) / 升终 1 X 浓度NaCl 80.0 g 137 mM KCl 2.0 g 2.7 mM Na2HPO414.4 g 100 mM KH2PO42.7 g 2 mM H2O 至 800 ml
11、 HCl 至 pH 7.4 H2O 至 1 升20X SSC / 升终 1 X 浓度NaCl 175.3 g 150 mM Na3citrate x H2O 88.2 g 15 mM H2O 至 800 ml 1M HCl 调节 pH值至 7.0 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 6 页,共 17 页 - - - - - - - - - H2O 至 1 升20X SSPE / 升终 1 X 浓度NaCl 175.3 g 150 mM NaH2PO4xH2O 27.6 g
12、 10 mM Na2EDTA 7.4 g 10 mM H2O 至 800 ml 10 M NaOH调节 pH值至 7.4 H2O 至 1 升5X Tris-甘氨酸 , Native电泳缓冲液/ 升终 1 X 浓度Tri 碱15.1 g 25 mM 甘氨酸72.0 g 192 mM H2O 至 1 升稀释溶液的pH至 8.3 5X Tris-甘氨酸 -SDS电泳缓冲液/ 升终 1 X 浓度Tri 碱15.1 g 25 mM 甘氨酸72.0 g 192 mM SDS 5.0 g 0.1% (w/v) H2O 至 1 升稀释溶液的pH至 8.3 5X Tris-三( 羟甲基 ) 甲基甘氨酸 -SDS
13、 电泳缓冲液/ 升终 1 X 浓度Tri 碱121.1 g 0.1 M 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页,共 17 页 - - - - - - - - - Tricine 179.2 g 0.1 M SDS 10.0 g 0.1% (w/v) H2O 至 1 升稀释溶液的pH至 8.3 50X TAE (Tris-醋酸 -EDTA)电泳缓冲液/ 升终 1 X 浓度Tri 碱242.0 g 40 mM 冰醋酸57.1 ml 20 mM 0.5 M EDTA (pH
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