Loading Buffer 蛋白印记(6页).doc
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1、-5SDS-PAGE Loading Buffer的配制(10 ml)(本方案摘自蛋白质技术手册汪家政、范明)组分:Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);-巯基乙醇(14.4 mM)配制过程:1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 ml;1%的溴酚兰1 ml;2. 加入去离子水定容至10 ml;3. 分装;4. 在4可保存数周,-20可保存数月之久。你还可以参考下面这个配方:2SDS凝胶加样缓冲液 组分(摘自分子克隆第三版)Tris-HCl pH6.8(100 mM)
2、;SDS (4%);溴酚兰(0.2%);甘油(20%);-巯基乙醇或二硫苏糖醇(200 mM)不含硫代试剂的加样Buffer可在室温保存。-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加入。我想配点儿5X的loading buffer, 分子克隆上写着10%SDS,我的配制思路是(200ml)25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及1g溴酚蓝配制到100mL,然后再加100ml甘油,但是问题是20gSDS要溶解到那么小体积的水中实在是困难,我把SDS溶解(其实大部分是不溶的)放到65度烘箱里,放大概几个小时,SDS倒是溶了,但是变得非常黏稠,摇都摇不动的那种,跟果冻似的,请问这样配法是不是正确,
3、如果不正确应该怎样配,请配过的大虾教教我,最好有详细配制流程。5X的loading buffer已经配制成功,虽然SDS很难溶,但还是溶了。因为5X的上样量可以大一些,做western的时候比较有用,2X的我有配好的,呵呵我想说以下几点:1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了2.不知你为何要配那么多loading buffer(况且是5X的),这些东西都是用量很少的,建议你少配些,比如10 ml?3.以下就以2X loading buffer(配制1
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