CTAB法抽提真菌DNA(2页).doc
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1、-CTAB法抽提真菌DNA-第 2 页提取液:1M Tris.HCl pH8.0 10ml EDTA pH8.0 4mlCTAB 2gNaCl 巯基乙醇 2ml(使用时加入)加70ml ddH2O溶解定容至98ml步骤:1. 在液氮中研磨菌丝体,直到菌丝体研磨成解决白色细粉2. 将菌丝体装入1.5ml离心管中,加入600lCTAB提取液,于62-65水浴中加热1h,间或振荡数次3. 加入600lTris饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),【现用现配,按比例混匀后再加入管中】,温和振荡几次,然后在12000rpm下离心15分钟4. 取上清至新的离心管中,然后加入1/10体积的3M/L NaA
2、c,1倍体积的异丙醇,轻柔混匀,在-20下静置30-60分钟,在12000rpm下离心5分钟5. 离心后去上清,沉淀用70乙醇润洗2次6. 加入适量的TE缓冲液溶解沉淀,7. 加入1l RNase(10mg/ml)37水浴1小时8. 加入1倍体积的饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),【现用现配,按比例混匀后再加入管中】,温和振荡几次,然后在12000rpm下离心15分钟,取上清至新的离心管9. 加入1倍体积的氯仿,温和振荡几次,在12000rpm下离心15分钟,取上清至新的离心管中10. 加入2倍体积无水乙醇,-20静置30分钟以上,8000rpm离心12分钟11. 去除上清,沉淀用70乙醇润洗2次,加入100l TE缓冲液溶解沉淀,放入-20存放,待电泳检测
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